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Uso correcto de la autoclave

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Proper Use of Autoclaves

6.1: Proper Personal Protective Equipment

6.11: Fume Hoods and Laminar Flow Cabinets

87,164 Views

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06:34 min

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April 30, 2023

Overview

Robert M. Rioux y Zhifeng Chen, Universidad Estatal de Pensilvania, University Park, PA

autoclave es uno de los métodos más comúnmente utilizados en el laboratorio con el fin de descontaminación. Los más comunes elementos descontaminados con autoclave son aquellas que en contacto con muestras biológicas (típicamente aquellos que contienen microorganismos). El autoclave funciona mediante la utilización de vapor a presión de alta temperatura para matar microorganismos presentes en los materiales cargados. Suficiente transferencia de calor y flujo de vapor son esenciales para autoclave altamente eficiente, que son los principios claves a considerar cuando los materiales de embalaje. Necesidades de seguridad a tener en cuenta cuando trabajo con el autoclave debido a la alta presión y temperatura empleadas, que también establece los límites en que los materiales son compatibles y pueden requerir especial atención al embalaje, carga y descarga de materiales .

Principles

autoclave utiliza altas temperaturas (121 ° C), vapor de alta presión (por lo menos 15 psi) durante al menos 30 minutos lograr la descontaminación. Mata microorganismos por deshidratación de la célula bajo condiciones severas. La velocidad de escape depende de la naturaleza de la carga. Para materiales sólidos secos, puede llegar un ciclo de escape rápido. Sin embargo, los desechos líquidos y biológicos requieren ciclos de escape lento para evitar que derramen líquidos sobrecalentados. Cintas de indicador a menudo se utilizan para validar la efectividad de la esterilización en autoclave. Los indicadores de trabajan mediante el uso de marcadores químicos sensible de calor para ver si la autoclave cumple con los requisitos de temperatura (121 ° C). Cambio de color de la cinta de un indicador implica un autoclave efectiva, considerando que no hay cambio de color indica carga no es descontaminada. Sin embargo, no usar el indicador como la única fuente para pruebas de descontaminación, ya que la cinta no refleja si los microorganismos están muertos o no, pero sólo si la autoclave cumple con los requisitos de temperatura. Las condiciones de trabajo también establece límites sobre qué materiales son adecuados y que plantean problemas de seguridad. En principio, evite cualquier material que fácilmente quema, funde o explotar bajo condiciones de alta temperatura y presión. Tenga cuidado cuando carga y descarga de los autoclaves para evitar quemaduras por vapor o agua caliente. Para lograr descontaminación suficiente, asegúrese de que exista suficiente transferencia de calor y flujo dentro de las autoclaves, bolsas y materiales envasado.

Procedure

1. desgaste adecuada protección Personal equipo (PPE)

la alta presión y temperatura condiciones encontradas durante el autoclavado plantean posibles riesgos de quemaduras o explosión de calor. PPE apropiado incluye una capa del laboratorio, gafas, guantes y zapatos cerrados; Estos deben ser usados cuando se carga y descarga de materiales de la autoclave. Cuando se trata de muestras líquidas, usar un escudo delantal y cara como PPE adicional.

2. preparación de materiales para cargar

identificar Autoclave Compatible y Autoclave incompatibles Material
aunque autoclave representa un método comúnmente utilizado y económico para la descontaminación, no todos los materiales son adecuados para autoclave debido a la alta presión y temperatura de trabajo. En general, todos los materiales que se evaporan o derretir bajo el vapor de alta presión no son compatibles con esterilización en autoclave. Esto incluye materiales como solventes orgánicos, el plástico poco resistente al calor tales como poliestireno, polietileno y metales, excepto acero inoxidable. Nunca autoclave inflamables, corrosivos, tóxicos, reactivos o radiactivos químicos. Materiales compatibles para el autoclave son Pyrex o de tipo I borosilicato, polipropileno, policarbonato, guantes, acero inoxidable, puntas de pipeta, papel (poner dentro de bolsas de autoclave) y soluciones de medios de comunicación.
Tras la identificación de materiales compatible con autoclave, embalaje adecuado también es importante puesto que garantiza seguridad y eficiencia autoclavado. Aquí están los principios básicos cuando los materiales de embalaje:
1. siempre utilizar un contenedor secundario de polipropileno o de acero inoxidable.
2. Para muestras líquidas, llenar la cubeta alrededor de ½ completo y aflojar las tapas o cierres de ventilación. Nunca llene los contenedores sobre 2/3 completo con la tapa totalmente apretado.
3. Inspeccionar el recipiente de cristal para asegurarse de que no hay ningunas grietas. Si las grietas son identificadas, disponer de cristalería en un receptáculo apropiado. Nunca autoclave un vaso de vidrio roto conocido.
4. Utilice siempre bolsas de autoclave compatible con residuos de paquete. Las bolsas deben tener cintas de indicación en él y debe ser abiertas en los extremos antes de cargar para permitir que el vapor dentro de la bolsa.
5. No sobrecargue las bolsas o contenedor para permitir suficiente flujo para la completa esterilización de vapor. Deje espacio entre los elementos de.
6. Don ' materiales incompatibles de la mezcla t.
7. Nunca coloque objetos afilados en el bolso de la basura.

3. Cargar el Material

Compruebe el autoclave ' interior s para hacer que no haya ningún peligro potencial a la izquierda del usuario anterior.
Limpiar el desagüe antes de cargar los materiales para permitir la buena circulación.
Asegurarse de que las bolsas no toquen las paredes interiores de la autoclave para evitar que se derritan.
Líquidos y materiales secos requieren ciclos diferentes y necesitan ser esterilizado por separado.
Cierre la puerta firmemente.

4. Funcionamiento de Autoclave

solo el personal entrenado debe poder operar autoclaves. Consulte el manual del equipo si es necesario, ya que los protocolos de operación varían entre autoclaves diferentes.
Una vez asegurándose de que la puerta del autoclave cerrada firmemente, ajuste la temperatura de esterilización en autoclave a 121 ° C y mantener por lo menos 15 psi de presión.
Para establecer el tiempo de la autoclave y el ciclo, deben considerarse los siguientes factores:
1. recomendaciones de equipos del fabricante ' el manual.
2. El tipo de material cargado dentro: secas o líquidas.
3. Las cantidades de materiales cargado.
4. Forma y tamaño de envase de.
5. Termoconductividad de envase y materiales.
6. Propósito de la descontaminación.

5. Descarga del material esterilizado

use PPE adecuado como se describe arriba.
Asegúrese de que la temperatura y la presión de la autoclave han regresado a un rango seguro.
Soporte detrás de la puerta y con cuidado Abra la puerta para liberar todo el vapor sobrante dentro de la autoclave en la sala de.
Permitir los materiales dentro de la autoclave reposar 10 min liberar cualquier vapor o aire caliente atrapados dentro del material.
No sacuda cualquier material líquido mientras se retira de la autoclave. Si es necesario, etiqueta el material caliente para evitar el calor se quema a una persona que puede ser potencialmente consciente del hecho de que el material ha sido esterilizado.
Espere a que el material se enfríe a temperatura ambiente antes de transportar dentro del laboratorio o fuera del laboratorio. En ambos casos, asegúrese de utilizar la contención adecuada para el transporte.
Registrar los detalles de los materiales y las condiciones de esterilización en autoclave en un usuario ' s log

autoclave es uno de los métodos más comúnmente utilizados en el laboratorio para la descontaminación.

Muchos científicos, en particular aquellos que trabajan con muestras biológicas, medios, necesidad de esterilizar equipo y autoclaves proporcionan una manera rápida y económica para descontaminar los materiales. Utilizan vapor a altas temperaturas y presión para matar microorganismos. Debido a estas condiciones extremas, sin embargo, se debe utilizar cuidadosamente.

Este video ilustrará cómo autoclaves funcionan y cómo usarlos correctamente.

en el autoclave, los materiales se calientan con vapor a temperaturas de 121 grados centígrados a presiones de por lo menos 15 psi. Después de al menos 30 minutos, estas condiciones deshidratar y matar a las células.

Autoclaves pueden esterilizar materiales líquidos y sólidos, pero diferentes configuraciones de funcionamiento tienen que ser considerados. Líquidos requieren tiempos más largos de sólidos para el vapor de escape para evitar ebullición flash. Además, mayores volúmenes de materiales líquidos tardan más tiempo en calentarse hasta la temperatura correcta de.

No todos los materiales pueden soportar las temperaturas dentro de un autoclave. Por lo tanto, nunca autoclave cualquier cosa que se derrite, quemaduras, es explosivo, o líquidos que se evaporan. Además, no autoclave productos químicos tóxicos o radiactivos.

Ahora, le mostraremos cómo preparar las muestras para el autoclave y cómo operar una.

en primer lugar, seleccionar los materiales a ser autoclavado y utilizar solamente instrumentos y contenedores compatibles. Pyrex, vidrio borosilicato, acero inoxidable, polipropileno y policarbonato pueden utilizarse para esterilización en autoclave.

Otros materiales comunes de laboratorio como las pipetas y cajas son también compatibles. El papel puede ser esterilizado en autoclave compatible con bolsas.

Residuos sólidos

también pueden ser esterilizado en un bolso apropiado. Deje espacio en esta bolsa para permitir que el vapor circule y atar los extremos. Por último, antes de autoclavar Asegúrese de crear una pequeña apertura en la bolsa para permitir que ingrese vapor.

Para medios acuosos y otras muestras de líquido compatibles, utilice un recipiente intacto sin grietas. Llene el recipiente cerca de la mitad completo y nunca más de dos tercios llena.

Para ventilar los gases de un contenedor de liquido, afloje la tapa. Si no hay, cúbralos ligeramente con papel de aluminio para evitar la contaminación del material esterilizado.

Poner todos los materiales en un contenedor secundario de polipropileno o de acero inoxidable. Materiales sólidos y líquidos separados para ser esterilizados en autoclave. Deje espacio entre los materiales y no llene el contenedor de.

Por último, coloque un trozo de cinta de autoclave a todos materials. Esta cinta tiene indicadores sensibles a la temperatura que se da vuelta a negros si se ha alcanzado la temperatura suficiente.

cuando utilizando un autoclave use equipo de protección personal para protegerse de los riesgos altos de temperatura y presión. Esto incluye gafas de protección de PPE estándar, batas de laboratorio y zapatos cerrados y guantes resistentes al calor. Usar un escudo delantal y la cara al manipular muestras líquidas.

En el autoclave, primero abra la puerta y busque cualquier peligro dentro. Carga de líquido y secar materiales por separado, ya que requieren ciclos de autoclave diferentes.

Para evitar la fusión Asegúrese que materiales no toquen las paredes. Mantener suficiente espacio entre los materiales para asegurar un buen flujo de calor. Por último, cierre y selle la puerta.

Autoclaves diferentes tienen diferentes instrucciones. Ciclos se pueden establecer configuración manual de la temperatura y el tiempo, o seleccionando de una lista preestablecida. En general, use los ciclos recomendados para el tipo de material se descontamina.

Una variedad de ciclos existen para sólidos y líquidos, así como para diferentes cantidades de material y residuos a ser esterilizados en autoclave. Cuando se ejecuta un ciclo, asegurar que la temperatura ha llegado al menos a 121 grados centígrados y la presión por lo menos 15 psi

Una vez el ciclo, asegúrese de que la presión ha vuelto a cero y el autoclave se enfríe. Abra con cuidado la puerta para dejar salir el vapor sobrante. Entonces, permita que los materiales a reposar durante 10 minutos liberar cualquier gases calientes. La cinta de autoclave ahora tiene rayas negras o decir esterilizar, aunque esto no es una garantía de que la esterilización ha tenido lugar.

Uso de EPP adecuado, retire los materiales, asegurándose de no agitar las muestras líquidas. Anote su uso en el registro, incluyendo el tipo de sustancias y cualquier circunstancias especiales si. Por último, transporte de los materiales a una zona segura o una campana de flujo laminar que se enfríe.

sólo ha visto introducción de Zeus para autoclaves. Ahora debe comprender qué materiales pueden esterilizarse en autoclave, cómo prepararlos y cómo utilizar con seguridad el instrumento. ¡Gracias por ver!

Applications and Summary

en comparación con los métodos de descontaminación química o radiación, autoclave representa un método más económico y práctico en el laboratorio. Sin embargo, para garantizar la seguridad (evitar la fusión, calor quemaduras o explosión), identificar materiales compatible con autoclave y la práctica adecuada de embalaje, carga y descarga. Asegurar suficiente eficacia de descontaminación requiere contenedor o materiales del bolso y suficiente espacio entre los materiales dentro de la autoclave. Inspección del autoclave en un horario regular y el mantenimiento son necesarias para autoclaves están operando bien.

References

Autoclave Safety and Operation, 2015, Division of Research Safety, University of Illinois. at Autoclave Use, Environmental Health & Safety, Princeton University. atProper Use of a Steam Autoclave, 2016, Environmental Health & Safety, Arizona State University.
Fact Sheet: Using Autoclaves Safely, Environmental Health & Safety, California State University, Los Angeles.
Guideline for the Safe Use of Autoclaves, 2003, Environmental Health and Safety Service, University of Ottawa.

Transcript

Autoclaving is one of the most commonly used methods in the laboratory for the purpose of decontamination.

Many scientists, in particular those working with biological samples, need sterilized equipment and media, and autoclaves provide a quick and economical way to decontaminate materials. They use steam at high temperatures and pressure to kill microorganisms. Due to these extreme conditions, though, they must be used carefully.

This video will illustrate how autoclaves work and how to use them correctly.

In an autoclave, materials are heated with steam to temperatures of 121 degrees Celsius at pressures of at least 15 p.s.i. After at least 30 minutes, these conditions will dehydrate and kill cells.

Autoclaves can sterilize both liquid and solid materials, but different operating settings have to be considered. Liquids require longer times than solids to exhaust the steam, in order to prevent flash boiling. Additionally, larger volumes of liquid materials take longer to heat up to the correct temperature.

Not all materials can withstand the temperatures inside an autoclave. Therefore, never autoclave anything that melts, burns, is explosive, or liquids that will evaporate. Also, do not autoclave toxic or radioactive chemicals.

Now, we will show you how to prepare samples for the autoclave and how to operate one.

First, select the materials you will be autoclaving and only use compatible containers and instruments. Pyrex, borosilicate glass, stainless steel, polypropylene, and polycarbonate can be used for autoclaving.

Other common lab materials such as pipette tips and boxes are also compatible. Paper can be autoclaved in autoclave-compatible bags.

Solid waste can also be autoclaved in an appropriate bag. Leave space in this bag to allow steam to circulate and tie up the ends. Lastly, before autoclaving make sure to create a small opening in the bag to allow steam to enter.

For aqueous media and other compatible liquid samples, use an intact container without any cracks. Fill the container about half full and never more than two-thirds full.

To ventilate gasses from a liquid container, loosen the cap. If there is no cap, cover loosely with aluminum foil to prevent contamination of the autoclaved material.

Put all materials in a secondary container made of polypropylene or stainless steel. Separate solid and liquid materials to be autoclaved. Leave space between materials, and don’t overfill the container.

Lastly, attach a piece of autoclave tape to all materials. This tape has temperature-sensitive indicators that will turn black if sufficient temperature has been reached.

When using an autoclave wear appropriate personal protective equipment to protect against the high temperature and pressure risks. This includes standard PPE-safety glasses, lab coats, and closed-toe shoes and heat-resistant gloves. Use an apron and face shield when handling liquid samples.

At the autoclave, first open the door and check for any hazards within. Load liquid and dry materials separately, as they require different autoclave cycles.

To prevent melting make sure materials do not touch the walls. Ensure a good flow of heat by keeping sufficient spacing between materials. Lastly, close and seal the door.

Different autoclaves have different operating instructions. Cycles may be set by manually setting the temperature and time, or by selecting from a preset list. In general, use the recommended cycles for the type of material you are decontaminating.

A variety of cycles exist for solids and liquids, as well as for different amounts of material and waste to be autoclaved. When you run a cycle, ensure that the temperature has reached at least 121 degrees Celsius and the pressure at least 15 p.s.i.

After the cycle is over, make sure the pressure has returned to zero and the autoclave has cooled down. Carefully open the door to let out leftover steam. Then, allow the materials to stand for 10 minutes to release any hot gasses. The autoclave tape should now have black stripes or say autoclaved on it, although this is not a guarantee that sterilization has taken place.

Wearing appropriate PPE, remove the materials, making sure to not shake any liquid samples. Note down your usage in the log, including the type of substances and any special circumstances if encountered. Finally, transport the materials to a secure area or a laminar flow hood to cool.

You’ve just watched JoVE’s introduction to autoclaves. You should now understand what materials can be autoclaved, how to prepare them, and how to safely use the instrument. Thanks for watching!

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