Question 1

¿Por qué las células B no pueden cultivarse directamente para producir anticuerpos monoclonales?

Accepted Answer

Las células B no sobreviven bien en cultivos a largo plazo, lo que hace imposible mantenerlas indefinidamente para la producción de anticuerpos. Para superar esta limitación, los científicos fusionan células B con células de mieloma inmortales para crear hibridomas, que combinan las propiedades productoras de anticuerpos de las células B con la capacidad de crecimiento indefinido de las células de mieloma.

Question 2

¿Cuál es la diferencia entre los anticuerpos policlonales y monoclonales?

Accepted Answer

Los anticuerpos policlonales son una mezcla de anticuerpos, cada uno reconociendo diferentes epítopos en un antígeno, producidos por múltiples clones de células B. Los anticuerpos monoclonales son anticuerpos idénticos producidos por una única línea celular de hibridoma, reconociendo solo un epítopo específico. Esto hace que los anticuerpos monoclonales sean más específicos y útiles para distinguir entre antígenos similares.

Question 3

¿Cómo asegura la dilución limitante la producción de anticuerpos monoclonales?

Accepted Answer

La dilución limitante es un proceso de dilución en serie que asegura estadísticamente que las células individuales se siembren en los pocillos de las placas de cribado. Los pocillos que contienen una célula crecen en poblaciones monoclonales que producen anticuerpos idénticos. Este método de clonación garantiza que la línea de hibridoma resultante libere solo el anticuerpo deseado de especificidad conocida.

Question 4

¿Qué papel juega el sulfato de amonio en la purificación de anticuerpos?

Accepted Answer

La precipitación con sulfato de amonio elimina los anticuerpos del medio de cultivo compitiendo con las proteínas por las moléculas de agua a través de interacciones hidrofílicas. Los iones de amonio y sulfato altamente cargados disminuyen la solubilidad de los anticuerpos, causando que se precipiten fuera de la solución. Este método de salado es una técnica estándar para la purificación de proteínas de los sobrenadantes de cultivo.

Question 5

¿Por qué se utiliza tubo de diálisis después de la precipitación de sulfato de amonio?

Accepted Answer

Los tubos de diálisis eliminan el sulfato de amonio residual de la solución de anticuerpos mediante intercambio osmótico. La solución de anticuerpos se coloca en tubos de diálisis y se sumerge en el tampón PBS durante la noche. El agua y los pequeños iones de sal pasan a través de la membrana del tubo mientras que los anticuerpos permanecen en el interior, resultando en un anticuerpo purificado libre de sulfato de amonio.

Question 6

¿Cómo se determina la concentración de anticuerpos después de la purificación?

Accepted Answer

La concentración de anticuerpos se mide utilizando un espectrofotómetro a 280 nanómetros, que detecta la absorbancia de proteínas. Se prepara una dilución 20 veces de la muestra de anticuerpos en PBS, luego se analiza utilizando el espectrofotómetro. La concentración se calcula utilizando una fórmula estándar y se registra para la documentación y el almacenamiento del anticuerpo monoclonal purificado.

Question 7

¿Qué método de selección se utiliza para identificar los hibridomas que producen el anticuerpo deseado?

Accepted Answer

elisa ensayos indirectos sandwich y competitivos los métodos se utilizan para cribar los medios de cultivo de hibridomas para detectar la presencia del anticuerpo objetivo. Después de la fusión de hibridomas y la clonación por dilución limitante, ELISA detecta qué pocillos contienen células que producen el anticuerpo monoclonal deseado. Este paso de cribado asegura que solo se seleccionen para expansión y producción de anticuerpos los hibridomas con la especificidad de anticuerpo correcta.

Generación de anticuerpos: Producción de anticuerpos monoclonales mediante hibridomas - Cuestionario de evaluación