Cultivos de enriquecimiento: Cultivo de bacterias aerobias y anaerobias en medios selectivos y diferenciales

1. Preparación

1. Antes de comenzar, lávese bien las manos y ponte guantes de tamaño adecuado.
2. Esterilice la superficie de trabajo con 5% de hipoclorito sódico (blanqueador) y seque bien.
3. Coloque un lazo de inoculación en un matraz Erlenmeyer vacío de 120 ml para que no toque la parte superior del banco mientras trabaja.

2. Medios de crecimiento y culturas

1. Reúne cuatro platos de agar sal mannitol (MSA), agar azul de eosina metileno (EMB) y ocho agar de soja tríptico (TSA) del refrigerador (estos se pueden comprar comercialmente).
2. Coloque las placas en el área de trabajo limpia.
3. Reúne los siguientes cultivos de caldo: Escherichia coli, Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidermidisy Proteus vulgaris. Tenga cuidado: como se trata de organismos aeróbicos, las tapas de los tubos deben estar ligeramente sueltas.
4. Coloque todos los cultivos en un bastidor de tubo de ensayo en la superficie de trabajo limpia.

3. Transferencia de cultivos e incubación

1. Párese o siéntese en el banco con todos los materiales al alcance.
2. Para utilizar la técnica aséptica para transferir las bacterias a la placa, primero flamee el lazo hasta que esté brillante anaranjado - y luego deje que se enfríe en el aire.
3. Mientras el lazo se enfría, tome el cultivo de caldo de E. coli,y luego abra la tapa con el uso de su dedo meñique.
4. Llama rápidamente la abertura del tubo. Esto evita la contaminación.
5. Sumerja el lazo en el tubo y saque el organismo en el primer cuadrante de una placa EMB.
6. Después de que se realiza la primera racha, llama el bucle, y luego realizar una segunda racha cruzando la primera racha sólo una o dos veces. Esto permitirá el aislamiento de una sola colonia y determinar si hay alguna contaminación.
7. Repita esto hasta que los cuatro cuadrantes de la placa hayan sido rayados.
8. Ahora, transfiera cada uno de los cuatro organismos de la misma manera de rayado para que el producto final sea una placa MSA, una placa EMB y dos placas TSA separadas por organismo.
9. Una vez que todos los organismos han sido transferidos, llama el bucle una última vez y lo guarda.
10. Coloque 1 placa TSA con cada organismo en el paquete de gas y, a continuación, agite un sobre de gas antes de colocarlo en la cámara junto a las placas. Selle bien.
11. Incubar todas las placas a 37oC durante la noche.
12. Esterilice la superficie de trabajo una última vez con 5% de lejía.

4. Lectura y grabación de resultados

1. Retire las placas de la incubadora y colóquelas en un banco de laboratorio limpio
2. Tome nota del crecimiento de los organismos en cada placa de su cuaderno de laboratorio. En particular, tome notas detalladas sobre:
   1. Números y tamaño de las colonias (si están presentes) en cada plato, para cada cepa chapada
   2. Apariencia del agar que rodea a las colonias que crecen en las placas MSA
   3. Apariencia de cualquier colonia que crezca en las placas EMB
   4. Diferencias en el crecimiento entre las placas TSA cultivadas fuera en comparación con el interior del paquete de gas