Descongelación de embriones de conejo: un procedimiento de calentamiento para recuperar embriones de conejo criopreservados para la transferencia de embriones

La descongelación embrionaria es un proceso en el que los embriones congelados criopreservados se calientan y rehidratan, restaurando su actividad biológica.

Para descongelar embriones de conejo criopreservados en una pajuela criogénica sellada, retire la pajuela del nitrógeno líquido. Los embriones, con un volumen mínimo de medios que contienen crioprotectores, están físicamente aislados por segmentos de aire y medios dentro de la pajita. Coloque brevemente la pajita en el aire, facilitando la liberación de vapores de nitrógeno líquido atrapados, que de otro modo causarían daños en el embrión durante la exposición a temperaturas más cálidas.

El rápido aumento de las temperaturas criogénicas de nitrógeno líquido a temperaturas de congelación más altas inicia la formación de cristales de hielo dentro de la pajita criogénica, con el riesgo de dañar el embrión. A medida que comiencen a formarse cristales de hielo, sumerja inmediatamente la pajita en un baño de agua con temperatura controlada con agitación suave para una descongelación uniforme. Este paso elimina los cristales de hielo, protegiendo a los embriones del daño de los cristales de hielo.

Retire el tapón de la pajita. Corta el extremo sellado de la pajita; Coloque un microdispensador para liberar el contenido en una placa de cultivo con medios que contengan sacarosa. El medio ayuda a eliminar los crioprotectores de los embriones; La sacarosa evita la hinchazón excesiva de los embriones, restaurando su entorno fisiológico durante la rehidratación.

Transfiera los embriones a una placa fresca que contenga medios para eliminar completamente los crioprotectores, asegurando una rehidratación completa. Los embriones descongelados están listos para los procedimientos de transferencia de embriones.

Para descongelar los embriones para una transferencia, coloque el ministraw horizontalmente, a 10 centímetros del vapor de nitrógeno líquido durante 20 a 30 segundos. Cuando comience el proceso de cristalización dentro del ministraw, sumerja la pajita en un baño de agua a 25 grados centígrados durante 10 a 15 segundos. Retire inmediatamente la paja y los tapones de algodón, y use un microdispensador acoplado para expulsar el contenido del ministraw en un plato que contenga medio base de 25 grados Celsius suplementado con una solución de sacarosa molar 0,33 en la que los embriones deben permanecer durante 5 minutos. Luego, transfiera los embriones a una placa de medio base fresco para otra incubación de 5 minutos.