Carga de perlas para introducir ácidos nucleicos en células cultivadas adherentes: una técnica para cargar plásmidos fluorescentes que codifican proteínas en células de mamíferos adherentes

Comience con un cultivo de células de mamíferos adherentes en una placa de cultivo. Transfiera perlas de vidrio esterilizadas, tratadas con álcali y de tamaño micrométrico a la cámara de un aparato de carga de perlas personalizado. Cubra la abertura de la cámara con una malla con aberturas de tamaño óptimo para permitir que las perlas pasen durante la carga. Asegure la malla con un conjunto de cámara de imágenes.

Retire el papel de la placa. Pipetee una suspensión de ADN plasmídico que codifica proteínas reporteras fluorescentes en la placa para una distribución uniforme sobre las células. Con el aparato de carga de perlas, disperse suavemente una monocapa de perlas de vidrio sobre las celdas. Golpee brevemente la placa de cultivo con la fuerza adecuada.

Las perlas de vidrio ruedan brevemente sobre las células adherentes, mientras que el tratamiento alcalino las hace menos adherentes a las células. El impacto de las colisiones entre perlas y células transmite una tensión adecuada creando interrupciones localizadas en las membranas celulares. Estos poros transitorios formados de pequeñas dimensiones facilitan la absorción de ADN plasmídico en las células al tiempo que evitan la entr