Tinción de células con ácido peryódico-Schiff: una técnica in vitro para detectar los niveles de glucógeno en células mononucleares de sangre periférica

Las células mononucleares de sangre periférica, o PBMC, son células sanguíneas circulatorias con núcleos grandes y únicos, que comprenden linfocitos B y T, células asesinas naturales, monocitos y células dendríticas. Las PBMC almacenan el excedente de glucosa en forma polimérica como glucógeno, un polisacárido ramificado, en su citoplasma.

Para detectar la presencia de glucógeno en las PBMC, prepare un frotis uniforme de PBMC aislados en un portaobjetos de vidrio. Trate las células con formalina, una solución fijadora que reticula las biomoléculas celulares, preservando la integridad estructural de las PBMC.

Sumerja parcialmente el portaobjetos en solución de amilasa. Esta enzima ingresa a las células e hidroliza el glucógeno en las células tratadas. Esto da como resultado dos poblaciones celulares distintas: células ricas en glucógeno tratadas con enzimas y células ricas en glucógeno no tratadas con amilasa.

Cúbralos con una solución de ácido peryódico que convierte oxidativamente los grupos hidroxilo de las moléculas de glucógeno en aldehídos.

Enjuague el portaobjetos con agua para detener la reacción de oxidación y eliminar el exceso de ácido periódico. Tratar el portaobjetos co