Electroforesis en gel de poliacrilamida de dodecil sulfato de sodio para el análisis de proteínas: una técnica para separar y visualizar proteínas basada en el peso molecular

Comience tratando la muestra de proteína con un tampón desnaturalizante que comprende un detergente: dodecil sulfato de sodio, SDS y un agente reductor: beta-mercaptoetanol. Caliéntalo brevemente. Durante este paso, el beta-mercaptoetanol interrumpe los enlaces disulfuro, lo que genera una conformación desplegada en la proteína.

Las proteínas desplegadas con sus aminoácidos hidrófobos expuestos se unen a la SDS cargada negativamente y adquieren una carga negativa uniforme. Agregue un tinte de seguimiento adecuado a la muestra para una visualización en tiempo real.

Ahora, cargue la muestra y el marcador de tamaño molecular estándar en pocillos separados presentes en el gel de apilamiento, la capa superior del gel de poliacrilamida que contiene una menor concentración de polímeros de acrilamida reticulados.

Conecte el aparato de gel lleno de tampón a la fuente de alimentación.

En presencia de un campo eléctrico, las proteínas cargadas negativamente migran libremente hacia el ánodo y se apilan para ingresar al gel de resolución, la capa inferior que contiene un gel de mayor concentración.

En el gel de resolución, las proteínas comienzan a migrar según su tamaño molecular, y las proteí