Question 1

¿Por qué es necesaria la fijación de tejidos en la preparación de muestras histológicas?

Accepted Answer

La fijación de tejidos preserva la estructura celular y tisular al prevenir la degradación causada por enzimas naturales liberadas después de la muerte celular. La fijación inhibe la actividad enzimática y hace que los sitios de escisión de proteínas sean irreconocibles. Los dos mecanismos principales son la reticulación, que forma enlaces covalentes para endurecer el tejido, y la coagulación, que deshidrata las proteínas usando alcoholes o acetona para deformar su estructura.

Question 2

¿Cuáles son los dos principales mecanismos de fijación de tejidos?

Accepted Answer

La reticulación implica la formación de enlaces covalentes dentro y entre proteínas, causando que el tejido se endurezca y resista la degradación. La coagulación deshidrata las proteínas a través de alcoholes o acetona, deformando su estructura terciaria para que las regiones hidrofóbicas se muevan a la superficie de la proteína. La fijación coagulativa ayuda a que los medios de incrustación como la cera de parafina penetren más eficazmente en el tejido.

Question 3

¿Cómo funciona la formalina como fijador en la preparación de tejidos?

Accepted Answer

La formalina, formaldehído disuelto en agua, se une a las aminas primarias en las cadenas laterales de aminoácidos como la lisina y la glutamina, formando enlaces cruzados estables llamados puentes metileno. Este proceso de entrecruzamiento es inherentemente lento, requiriendo 1-2 días para completarse. La formalina funciona mejor cuando se tampona con fosfato para mantener un pH neutro y prevenir artefactos en el tejido.

Question 4

¿Qué factores deben considerarse antes de que comience la fijación de tejidos?

Accepted Answer

Considere la difusividad de la muestra: los fijadores penetran el tejido a tasas relacionadas con el coeficiente de difusión y el tiempo, por lo que las muestras deben limitarse a un grosor de 4 mm para una fijación completa. También considere el volumen del fijador y el pH. La relación fijador-muestra debe ser de al menos 40:1 para prevenir la depleción del reactivo. La formalina debe estar tamponada con fosfato para mantener un pH neutro y evitar artefactos en el tejido.

Question 5

¿Cuál es el propósito de incorporar medios en la preparación histológica?

Accepted Answer

La inclusión de medios soporta especímenes con rigidez mecánica similar al tejido mismo. La cera de parafina es el medio de inclusión más común. La elección del medio de inclusión apropiado es crítica porque los medios que son demasiado rígidos o demasiado débiles causan defectos de sección. Antes de la inclusión en parafina, las muestras deben estar deshidratada reemplazando el agua con etanol, luego con xilenos, y finalmente con cera de parafina caliente.

Question 6

¿Cómo difiere la crioseccionado de la sección tradicional de parafina?

Accepted Answer

La crioseccionadología evita la fijación al congelar rápidamente el tejido en medio OCT (temperatura óptima de corte), luego seccionar con un criostato mantenido a -20°C. A diferencia de las secciones de parafina que requieren tratamiento en baño de agua, las secciones congeladas se levantan directamente sobre portaobjetos de vidrio cargados positivamente inmediatamente después de la sección. Este método preserva mejor la estructura de las proteínas para el etiquetado con anticuerpos ya que no se produce reticulación.

Question 7

¿Cuáles son los métodos alternativos de incrustación a la cera de parafina?

Accepted Answer

El agar embebido cubre muestras con agarosa líquida recién preparada que fija el tejido en su lugar a medida que se enfría. Los vibrotomos con cuchillas vibratorias cortan secciones gruesas de 50-1000 µm de muestras incrustadas en agarosa. Las muestras generalmente se retiran de la agarosa antes de teñir y se montan en portaobjetos con grasa de vacío. Las secciones gruesas de agarosa se observan mejor usando luz principio de microscopía instrumentación y aplicaciones para imágenes de alta resolución.

Preparación de muestras histológicas en la microscopía de luz - Cuestionario de evaluación