Question 1

¿Cuál es la diferencia entre líneas celulares inmortalizadas y líneas de células madre?

Accepted Answer

Las líneas celulares inmortalizadas se derivan de organismos multicelulares con mutaciones que afectan la regulación del ciclo celular, permitiendo una proliferación indefinida. Las líneas de células madre se generan aislando células multipotentes autorrenovables de tejidos adultos o embrionarios. Ambas pueden mantenerse indefinidamente en cultivo en condiciones apropiadas, pero las células madre conservan la pluripotencia mientras que las células inmortalizadas no.

Question 2

¿Por qué es importante cambiar el medio de cultivo celular regularmente?

Accepted Answer

Los metabolitos tóxicos se acumulan en los medios de cultivo celular con el tiempo, disminuyendo el pH y reduciendo la disponibilidad de nutrientes. Los medios frescos mantienen la salud celular y apoyan la expansión continua. Los indicadores de color del medio como el rojo fenol señalan cuándo se necesitan cambios: el naranja indica medio fresco, el amarillo indica condiciones ácidas que requieren un cambio inmediato de medio y el rosa sugiere que el pH es demasiado básico.

Question 3

¿Qué significa el 90% de confluencia y por qué es importante para el pase de células?

Accepted Answer

La confluencia se refiere al porcentaje de superficie del contenedor de cultivo cubierta por células. Al 90% de confluencia, las células adherentes cubren la mayor parte del fondo del contenedor y deben ser pasadas para prevenir el sobrecrecimiento y mantener la salud celular. Monitorear la confluencia asegura que las células se dividan en el momento óptimo para la expansión y previene la acumulación de metabolitos tóxicos.

Question 4

¿Cuáles son los componentes esenciales de un medio completo de cultivo celular?

Accepted Answer

El medio completo requiere suero como el Suero Bovino Fetal tratado térmicamente para factores de crecimiento, antibióticos como penicilina y estreptomicina para prevenir la contaminación, y factores de crecimiento adicionales como el factor de crecimiento de fibroblastos para prolongar la expansión. Cada línea celular requiere un cóctel específico de suplemento de crecimiento adaptado a sus necesidades. Guarde el medio completo a 4°C cuando no esté en uso.

Question 5

¿Cómo se usa la tripsina para eliminar células adherentes de las placas de cultivo?

Accepted Answer

La tripsina es una enzima digestiva que escinde las proteínas que unen las células a superficies plásticas. Primero, las células se lavan con solución salina tamponada con fosfato libre de calcio y magnesio, luego se agrega tripsina y se incuba a 37°C durante aproximadamente 5 minutos. Un cronometraje cuidadoso es crítico para evitar dañar las proteínas de la superficie celular. Se añade medio fresco para detener la proteólisis antes de transferir las células a un tubo cónico para contar usando métodos y aplicaciones de hemacitómetro.

Question 6

¿Cuáles son los métodos alternativos para eliminar células que son demasiado adherentes para el tratamiento estándar con tripsina?

Accepted Answer

Para células sensibles a la digestión enzimática o extremadamente adherentes a las placas, un raspador de células puede eliminar suavemente las células del fondo del contenedor de cultivo. Alternativamente, se puede usar una pipeta serológica en un movimiento de raspado firme mientras se enjuaga con medio. La disociación mecánica requiere cuidado, ya que estas células delicadas pueden dañarse con estos métodos.

Question 7

¿Cómo se pueden expandir los cultivos celulares más rápidamente de lo que permiten los matraces de capa única?

Accepted Answer

Los matraces multicapa expanden los cultivos celulares de 3 a 5 veces en comparación con los matraces de una sola capa, permitiendo una escalabilidad más rápida y más reproducible de la expansión celular. Estos recipientes de cultivo especializados proporcionan una mayor superficie para el crecimiento celular, lo que los hace ideales para generar grandes números de células de manera eficiente mientras se mantienen las condiciones de cultivo apropiadas.

Pases celular - Cuestionario de evaluación