Question 1

¿Cuál es la diferencia entre transfectar ADN y ARN en células?

Accepted Answer

La transfección de ADN permite la expresión de proteínas utilizando la maquinaria de la célula, mientras que la transfección de ARN, particularmente el ARN bicatenario o siRNA, detiene la producción específica de proteínas al detener la traducción. El ADN debe llegar al núcleo para una expresión efectiva, mientras que el ARN actúa en el citoplasma. El ADN puede incorporarse de manera estable en el genoma o expresarse transitoriamente, mientras que los efectos del ARN son temporales.

Question 2

¿Cómo entregan los métodos de transfección química material genético a las células?

Accepted Answer

La transfección química utiliza moléculas portadoras con carga positiva, como lípidos catiónicos, fosfato de calcio o polímeros, que se complexan con ácidos nucleicos con carga negativa. Estos complejos se adhieren a la membrana celular con carga negativa a través de atracción electrostática, luego ingresan mediante endocitosis en vesículas unidas a la membrana llamadas endosomas. Los ácidos nucleicos escapan del endosoma y llegan a su destino en el citoplasma o el núcleo.

Question 3

¿Qué condiciones celulares optimizan la eficiencia de la transfección?

Accepted Answer

Las células deben estar en fase logarítmica de crecimiento y entre un 40 y un 80% de confluencia al momento de la transfección. Prepare las células cosechando las del día anterior, contándolas y sembrando a la concentración apropiada. Después de añadir los complejos de ácido nucleico y reactivo, incube durante la noche para permitir la adhesión y la transfección. Reemplace el medio con cultivo fresco después de 24 horas para apoyar la recuperación celular y la expresión génica.

Question 4

¿Cómo se mide la eficiencia de transfección en células?

Accepted Answer

Los sistemas de reporteros unidos a genes insertados miden la eficiencia de transfección de ADN. La proteína fluorescente verde puede ser observada directamente, mientras que la actividad de la enzima luciferasa se mide usando ensayos colorimétricos. La transfección estable se verifica mediante análisis genómico como RT-PCR. Para el éxito del silencimiento de siRNA, el análisis de inmunoblotting determina los niveles de proteína diana; la transfección exitosa disminuye la proteína diana mientras que los genes de mantenimiento del hogar como GAPDH permanecen estables.

Question 5

¿Cuál es la diferencia entre transfección estable y transitoria?

Accepted Answer

La transfección estable ocurre cuando el ADN transfectado se integra en el genoma y persiste a través de la división celular, creando cambios genéticos permanentes. La transfección transitoria implica ADN que permanece fuera del genoma, resultando en una expresión proteica temporal que dura de 24 a 96 horas antes de perderse. La transfección estable se mide mediante análisis genómico, mientras que los efectos transitorios se detectan a través de sistemas reporteros.

Question 6

¿Cuáles son los métodos físicos alternativos para transfectar células?

Accepted Answer

La electroporación utiliza corriente eléctrica para dañar temporalmente la membrana celular, permitiendo la entrada de ADN o ARN antes de que las células se reparen. Una pistola genética dispara partículas de oro recubiertas con ADN directamente en las células; las partículas que llegan al citoplasma permiten la transfección. Estos métodos físicos complementan los enfoques químicos y son útiles para tipos de células resistentes a los reactivos químicos o para aplicaciones in vivo como la transfección de tejido cerebral.

Question 7

¿Cómo puede usarse la co-transfección para estudiar mutaciones de proteínas?

Accepted Answer

La co-transfección introduce simultáneamente ARN interferente y ADN mutante en la misma célula. El ARNi regula a la baja la proteína endógena mientras se produce la versión mutante transfectada. Comparar los resultados funcionales—como la recuperación de señales de reportero fluorescente—revela si la mutación preserva o deteriora la función de la proteína. Este enfoque permite una evaluación directa de los efectos de la mutación en los procesos celulares.

Introducción a la transfección - Cuestionario de evaluación