3.5: Mantenimiento de Drosophila

El éxito de la investigación sobre Drosophila melanogaster depende del correcto mantenimiento y cría de este valioso organismo modelo. El siguiente video discutirá los pasos necesarios para proporcionar una nutrición, alojamiento y manejo adecuados de la mosca.

Aunque comúnmente se la conoce como la mosca de la fruta, Drosophila melanogaster en realidad subsiste gracias a los microorganismos, como la levadura, que crecen en la fruta en fermentación. En el laboratorio, la dieta de la mosca se modifica con fines prácticos. Hay varias recetas disponibles, y todas contienen los componentes esenciales: azúcar y levadura. La siguiente receta es de la Universidad de Indiana en Bloomington, famosa por su gran variedad de cepas de moscas. Se compone de: agua estéril, levadura, harina de soja, harina de maíz amarillo, agar para la textura, jarabe de maíz y ácido propiónico para inhibir el crecimiento de moho y bacterias. Estos ingredientes se combinan, se calientan, se agitan y luego se distribuyen en viales de plástico mediante una bomba. Después de que se llenan, los viales se taponan con una tapa de algodón, se envuelven y se enfrían a 4 μC. Una vez solidificados, los alimentos se esterilizan en autoclave.

Ahora que hemos aprendido un poco sobre lo que comen las moscas, echemos un vistazo a dónde viven y cómo se manejan.

Se utiliza una variedad de recipientes para albergar moscas. Los viales se utilizan para el mantenimiento de moscas y contienen de forma óptima entre 50 y 100 adultos. Las botellas se utilizan para cultivos más grandes y albergan entre 300 y 600 moscas adultas. Las incubadoras controlan el entorno y son capaces de contener cientos de viales y botellas. Las condiciones normales de almacenamiento de las moscas son de 25 ? C y 60-65% de humedad relativa.

Al trabajar con moscas, es importante practicar el etiquetado y la documentación adecuados, y mantener un entorno limpio para mantener la integridad de las líneas de moscas y los experimentos. Se debe cambiar un recipiente cuando aproximadamente la mitad de las pupas se hayan cerrado o dejado la cubierta de la pupa. Las carcasas aparecerán transparentes.

Para su información, la etapa de pupa ocurre entre las etapas larvaria y adulta, y es el momento en que las larvas incuban y se convierten en adultas. Para identificar las tripas de las pupas como transparentes, sostenga el recipiente frente a una fuente de luz e inspeccione la pupa.

Las moscas se transfieren a viales con medios frescos. ¿Un nombre elegante para la comida para moscas? a través de un proceso conocido como "voltear moscas". Antes de voltear moscas, inspeccione la integridad del medio. Las moscas no pueden sobrevivir con alimentos agrietados por la sequedad o contaminados con moho o bacterias.

Para voltear moscas, primero, golpee suavemente el frasco de moscas en el mostrador para derribar las moscas de los lados del vial. A continuación, retire rápidamente el tapón e invierta rápidamente las moscas del recipiente antiguo en uno nuevo. Este proceso se realiza rápidamente, para evitar que las moscas escapen o sean aplastadas por el tapón, y para evitar que las moscas sueltas ingresen al vial durante el volteo.

Si bien el volteo de moscas es el método preferido para la transferencia masiva de Drosophila, se requiere anestesia para clasificar las moscas. Aquí se discutirán dos métodos de anestesia: enfriamiento y uso de dióxido de carbono. Para enfriar las moscas, coloque el cultivo en un -20 ? C Congelar durante 8-12 minutos. Luego, coloque las moscas en un espacio de trabajo plano y refrigerado para su selección. Las moscas también se pueden anestesiar con frío enfriándolas directamente sobre una superficie congelada.

El dióxido de carbono es un método preferido para la anestesia porque no causa mortalidad aguda en moscas ni peligro para el investigador. El sistema de suministro de CO2 se compone de: un tanque de CO2; un tubo conectado a una aguja, para anestesiar moscas en viales y botellas; y un tubo conectado a una placa de CO2 para su análisis bajo el microscopio.

Para anestesiar a las moscas, inserte la aguja de CO2 a través del tapón. Alternativamente, golpee el recipiente contra una superficie, retire el tope e invierta rápidamente las moscas en una placa de CO2, manteniendo un sello cerrado hasta que las moscas estén inmóviles. Con un cepillo o fórceps, mueva suavemente las moscas al nuevo recipiente.

Para descartar las moscas no deseadas, tírelas en una morgue de moscas, que consiste en una botella grande llena de isopropanol o etanol y aceite mineral cubierta con un Embudo.

Ahora que hemos visto cómo se mantienen y manejan las moscas en el laboratorio, echemos un vistazo a cómo se modifican las condiciones de alojamiento y alimentación para diferentes experimentos.

Algunos experimentos requieren un alojamiento alternativo para contener una mayor cantidad de moscas.

En este experimento, la investigadora utiliza una jaula de población de moscas para recolectar una gran cantidad de embriones. Una jaula de población de moscas es una caja de plástico transparente capaz de contener miles de moscas. El investigador libera las moscas deseadas de varias botellas en la jaula de población de moscas, luego coloca placas de agar en la jaula para recolectar embriones.

Algunos experimentos exigen la manipulación de la dieta de las moscas.

En este experimento, el investigador quiere observar la respuesta de escape de las moscas transgénicas que expresan un canal iónico activado por la luz en las neuronas que regulan a las moscas. Respuesta de escape. La dieta de Drosophila se complementa con "all-trans-retinal", que es un cofactor de este canal y le permite funcionar. Esto se hace derritiendo el alimento y agregando el reactivo. A continuación, la mosca se expone a una luz azul que activa el canal e induce la respuesta de escape, y se mide el tiempo que tarda en volar.

Se puede manipular una variedad de condiciones de alojamiento y manejo para la experimentación.

En este experimento, se crea una elaborada "torre de energía" para estudiar los efectos del ejercicio en Drosophila. La torre de energía es una máquina que sube y baja continuamente, aprovechando la respuesta natural de la mosca para moverse hacia arriba, en contra de la gravedad, lo que se conoce como "geotaxis negativa".

El rendimiento de las moscas ejercitadas en la torre de energía se mide mediante un ensayo de geotaxis negativo iterativo rápido, o ensayo RING para abreviar. Las moscas en frascos vacíos se colocan frente a una cámara. Se golpean los viales y se registran las distancias ascendidas. Este experimento muestra que, en comparación con un grupo de control, el ejercicio tuvo un impacto positivo en la actividad a lo largo del tiempo.

Este video de JoVE ha cubierto el mantenimiento y la cría de Drosophila melanogaster. Después de ver este video, debería ser capaz de preparar medios de comida para moscas, identificar correctamente el alojamiento adecuado, voltear moscas y realizar experimentos sencillos. ¡Gracias por mirar!