Question 1

¿Qué condiciones de temperatura son las mejores para cultivar C. elegans en el laboratorio?

Accepted Answer

C. elegans puede cultivarse a 16, 20 o 25 °C dependiendo de los requisitos experimentales. La temperatura afecta directamente la velocidad del ciclo de vida: a 25 °C, los gusanos completan su ciclo de vida 2.1 veces más rápido que a 16 °C. Un crecimiento más rápido significa que los gusanos maduran más rápido, ponen más huevos y consumen más alimento, lo que hace que la selección de temperatura sea crítica para el diseño experimental.

Question 2

¿Qué comen los C. elegans y cómo se los alimenta en el laboratorio?

Accepted Answer

C. elegans se alimentan de OP50, una cepa estandarizada de E. coli utilizada en todos los laboratorios de gusanos en todo el mundo. En la naturaleza, los gusanos se alimentan de materia vegetal en descomposición, pero en el laboratorio consumen OP50 cultivado en placas de medio de crecimiento de nematodos (NGM) o en medio líquido. Esta dieta estandarizada asegura condiciones experimentales consistentes en todas las instalaciones de investigación.

Question 3

¿Cómo se hacen y preparan las placas NGM para el cultivo de C. elegans?

Accepted Answer

Combine los ingredientes del medio de crecimiento de nematodos con agua desionizada, autoclave durante al menos 15 minutos, luego enfríe a 55 °C. Agregue aditivos asépticos si es necesario, pipetee en placas de Petri hasta que estén 2/3 llenas y seque durante la noche. Inocule con OP50 E. coli resuspendido a una concentración 10X, seque durante la noche y luego exponga a la luz UV para la esterilización antes de su uso.

Question 4

¿Qué es un gancho para gusanos y cómo está construido?

Accepted Answer

Una pinza para gusanos es una herramienta fabricada con alambre de platino-iridio de calibre 30 sellado en una punta de pipeta Pasteur. El alambre se aplana en el extremo y se dobla hacia arriba para formar una cuchara, luego se lija hasta que quede suave. La pinza permite a los investigadores manipular y transferir gusanos individualmente bajo un microscopio de disección sin dañarlos ni la superficie de agar.

Question 5

¿Cómo se congelan y recuperan los C. elegans para el almacenamiento a largo plazo?

Accepted Answer

Lave las larvas recién hambrientadas en M9 Buffer, transfiéralas a un cryotube, añada un volumen igual de glicerol al 30% en M9 Buffer, y almacene a -80 °C. Para recuperar, descongele a temperatura ambiente, pipetee sobre placas NGM frescas con OP50, e incube a 20 °C. Después de 2-3 días, transfiera los animales a nuevas placas y permita una generación de reproducción antes de evaluar los fenotipos.

Question 6

¿Qué sucede con C. elegans cuando experimentan estrés o sobrepoblación?

Accepted Answer

Cuando se encuentran hambrientos o superpoblados, C. elegans entran en la etapa dauer, una etapa larval resistente al estrés donde los gusanos no envejecen. Este mecanismo de supervivencia permite que las poblaciones persistan en condiciones adversas hasta que los recursos estén disponibles nuevamente, haciendo que las larvas dauer sean útiles para el almacenamiento a largo plazo y la manipulación experimental.

Question 7

¿Cómo se utiliza la interferencia de ARN para estudiar la función de los genes en C. elegans?

Accepted Answer

Los investigadores preparan placas con E. coli que expresan ARNbi del gen diana, que los gusanos consumen. Los gusanos en cuarta etapa larval se transfieren a placas de RNAi para poner huevos, luego se recolecta la progenie en las etapas de desarrollo deseadas y se puntúan los fenotipos. Este enfoque silencia genes específicos para determinar su función, aprovechando conocimientos de desarrollo y reproducción de caenorhabditis elegans para la investigación de enfermedades.

Mantenimiento de C. elegans - Cuestionario de evaluación