Mantenimiento y cuidados básicos del polluelo

Los embriones de pollo son un gran modelo para estudiar el desarrollo temprano de los vertebrados, en parte porque son fáciles y económicos de mantener. A diferencia de la mayoría de los organismos modelo, que se crían en el laboratorio, los huevos de gallina fertilizados se compran a un proveedor externo. Además, el mantenimiento y el trabajo con los huevos requiere muy poco equipo especializado. Este video proporcionará información general sobre la adquisición y el mantenimiento de huevos de pollo, técnicas esenciales para trabajar con embriones en desarrollo y algunas aplicaciones prácticas de estos métodos.

Antes de hablar sobre el trabajo con pollitos en el laboratorio, repasemos cómo las gallinas cuidan sus huevos en casa. Aunque los huevos ya están fertilizados cuando se ponen, el desarrollo de los polluelos se detiene cuando los huevos se exponen a temperaturas externas más frías. Después de poner unos 12 huevos, la gallina se sienta en el nido para reanudar el desarrollo embrionario. Durante su incubación, la gallina rotará los huevos para calentarlos uniformemente y evitar que el embrión se pegue a la cáscara. Si todo va bien, 21 días después, mamá tiene una camada de pollitos.

Entonces, ¿cómo recolectan los científicos suficientes óvulos para sus experimentos? ¿Micrómetro? Eso podría llevar un tiempo. Debido a que las gallinas están ampliamente domesticadas, los huevos fertilizados se pueden obtener fácilmente de un criadero o granja de cría. Los huevos incluso se pueden pedir en etapas específicas de desarrollo.

Una vez que los óvulos han llegado al laboratorio, se pueden almacenar entre las 13 y las 16 ? C hasta por 5 días. Cuando esté listo para que se desarrollen, deje que los huevos se calienten a temperatura ambiente, luego transfiéralos a una incubadora oscilante a 37 ? C con un 60% de humedad hasta que alcancen la etapa deseada.

La mayoría de los experimentos realizados en pollitos requieren algunos pasos preparatorios, como verificar si los óvulos que recibió fueron fertilizados en primer lugar. Un enfoque fácil es usar una fuente de luz brillante o una caja de velas para iluminar el huevo. Con esta técnica, conocida como ovoscopia, se pueden visualizar estructuras internas como los vasos sanguíneos para confirmar la presencia de un embrión.

Dejar el huevo intacto mejora la supervivencia del polluelo, pero la cáscara impide el acceso al embrión. Para resolver este problema, los investigadores utilizan una técnica llamada ventanas.

Comienza poniendo los huevos de lado y marcando la parte superior para identificar el lado al que se elevará el embrión. Para evitar daños en la yema al cortar una ventana, se extrae una pequeña cantidad de albúmina, o clara de huevo, para alejar el embrión de la cáscara. Para hacer esto, primero esterilice la cáscara limpiándola con etanol al 70%. Después de que la cáscara se haya secado, alisa un trozo de cinta adhesiva sobre el extremo romo del huevo. Luego, use una aguja estéril para perforar la cinta y la cáscara. Inserte la aguja hacia abajo para evitar dañar la yema y retire 5 ml de albúmina. Por último, para evitar fugas de albúmina, selle el agujero con otro trozo de cinta adhesiva.

Para cortar la cáscara, coloca un pedazo de cinta adhesiva sobre el área que planeas ventanar. Con unas tijeras, haz un pequeño agujero en la cáscara y comienza a cortar una abertura circular. Durante este proceso, la cinta evitará que los fragmentos de cáscara caigan sobre el embrión.

Incluso después de la ventana, los embriones en etapa temprana pueden ser difíciles de visualizar debido a su pequeño tamaño y transparencia. Para mejorar el contraste entre el embrión y la yema, se puede utilizar tinta china diluida y no tóxica. La tinta se inyecta en la yema debajo del embrión y se deja que se difunda. El embrión ahora se puede ver en mayor contraste contra el fondo oscuro. Después de las manipulaciones experimentales, se debe volver a sellar la ventana con cinta adhesiva y volver a colocar el huevo en la incubadora.

Ahora que está familiarizado con las técnicas básicas para trabajar con huevos, veamos cómo se utilizan estos métodos para realizar experimentos con embriones de pollo.

Para empezar, la ovoscopia se puede utilizar para identificar la ubicación de las estructuras embrionarias en los óvulos intactos. Por ejemplo, las membranas extraembrionarias del embrión de pollo se utilizan comúnmente para la propagación de virus. Para infectar la membrana, se realizan ovoscopias para localizar la interfaz entre la cavidad alantoidea y el saco aéreo, con el fin de inyectar el virus directamente en la cavidad alantoidea sin dañar el embrión. Después de unos días de incubación, se pueden recolectar grandes cantidades de partículas virales del líquido alantoideo.

La ventana de óvulos es una práctica extremadamente útil, ya que permite el acceso al embrión para la experimentación. Muchos experimentos comienzan con la entrega de ADN en tejidos específicos a través de microinyecciones. A continuación, se colocan electrodos alrededor del tejido de interés y se aplica un campo eléctrico para permeabilizar temporalmente la membrana celular e impulsar los ácidos nucleicos hacia el interior de la célula.

Cuando se realizan experimentos en embriones tempranos, la inyección de tinta china es especialmente útil para visualizar tejidos transparentes. Aquí, el contraste mejorado permite a los investigadores microinyectar una solución de ADN en dominios de tejido refinados. En última instancia, esta técnica puede producir células marcadas individualmente, que se pueden monitorear a lo largo del tiempo para rastrear las divisiones celulares.

Acabas de ver el vídeo de JoVE sobre el mantenimiento de los pollitos. Esta presentación ha cubierto el manejo y mantenimiento básico de los huevos de gallina, técnicas comunes para trabajar con pollitos y algunos ejemplos de cómo se aplican estos métodos en la investigación biológica. ¡Gracias por mirar!