Name: Voorbereiding van de zeer poreuze Coordination Polymer Coatings op Macroporeuze Polymer Monoliths voor Enhanced Verrijking van fosfopeptiden (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-07-14T13:30:00.000+00:00
Duration: 10 min 27 s
Description: Leer de voorbereiding van zeer poreuze coördinatiepolymeercoatings op macroporeuze polymermonolieten voor verbeterde verrijking van fosfopeptiden. Deze methode verhoogt de selectiviteit door stapsgewijze groei van metaalorganische raamwerklagen.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Dit werk is uitgevoerd bij de Molecular Foundry, Lawrence Berkeley National Laboratory en ondersteund door het Office of Science, Office of Basic Energy Sciences, Scientific User Facilities Division van het Amerikaanse ministerie van Energie, onder contractnr. DE-AC02–05CH11231. De financiële steun van F.M. door een ME-Fulbright-beurs en A.S. door de Higher Education Commission of Pakistan wordt met dank erkend.

LET OP: Voordat u begint, controleert al het relevante materiaal data sheets (VIB&#39;s). Verscheidene van de chemicaliën die in de synthetische en uitvoeringsprocedures zijn giftig. Volg alle passende veiligheidsmaatregelen praktijken en het gebruik van geschikte beschermingsmiddelen (laboratoriumjas, full-length broek, dichte schoenen, een veiligheidsbril, handschoenen). Gebruik alle cryogene persoonlijke beschermingsmiddelen bij het hanteren van vloeibare stikstof voor de stikstofadsorptie metingen (isolerende handschoenen, gelaatsbescherming). 1. Poreuze Polymeer Monolith Voorbereiding in bulk en capillaire kolom Format <ol><li> Bulk Polymer Monolith voor de karakterisering <ol><li> Zuiver styreen, divinylbenzeen en methacrylzuur door een kolom van basisch aluminiumoxide, teneinde de polymerisatie remstoffen te verwijderen. Breng 10 g aluminiumoxide in een 25 ml wegwerp plastic spuit met een prop glaswol glasvezel verpakt in de spuit. Leid ongeveer 10 ml van het monomeer door de kolom. </li><li> Laad de monomeren (50 mg styreen, 100 mg divinylbenzeen en 50 mg methacrylzuur) en de poriënvormende middelen (300 mg tolueen en 300 mg isooctaan) in een 1 ml glazen flacon. Voeg de initiator van de polymerisatie, 4 mg 2,2&#39;-azobisisobutyronitril (AIBN, 1% betrokken op monomeren). </li><li> Homogeniseren door sonicatie gedurende 10 min. Verwijder opgeloste zuurstof door stikstof door de vloeistof gedurende 10 min. Verzegel de flacon dop paraffine film en plaats het in een waterbad bij 60 ° C gedurende 6 uur aan het mengsel te polymeriseren. </li><li> Afkoelen tot kamertemperatuur en breek de flacon voorzichtig. Breng de polymere monoliet in een extractiehuls cellulose. Plaats de extractiehuls in een Soxhlet extractiekamer en monteren aan een rondbodemkolf met een volume van methanol bevat, die ten minste drie keer het volume van de extractiekamer. Monteer een condensor aan de bovenkant van de extractiekamer. Voer Soxhletextractie door het koken van de methanolvoor 16 uur, zodat de volledige verwijdering van de onomgezette monomeren en poriënvormende middelen. </li><li> Droog overnacht in een vacuümoven bij 60 ° C. Controleer de aanwezigheid van carbon- functionele groepen te bevestigen de PCP door Fourier Transform Infrared Spectroscopy (FT-IR). Meet oppervlakte door stikstofadsorptie porosimetrie. </li></ol></li><li> Functionalisering van Silica Capillairen Voor de bereiding van monolithische kolommen <ol><li> Snij 2 m van een polyimide coating 100 urn id fused silica capillaire. Sluit hem aan een 0,25-0,50 ml glazen injectiespuit en was de capillaire met aceton. Verwijder de aceton door het spoelen van de capillair met water. </li><li> Teneinde de inwendige bekleding van de silica capillaire activeren, gebruikt een injectiepomp een 0,2 M waterige NaOH-oplossing stromen 0,25 pl / min gedurende 30 min. Spoel met water tot de effluent is neutraal. </li><li> Gebruik pH-papier strips effluent pH te controleren. Om de silanolgroepen van de capillaire protoneren, pomp een 0,2 M aqueoons HCl oplossing door het capillair 0,25 pl / min gedurende 30 min. Spoel met water tot de effluent is neutraal. Spoelen met ethanol. </li><li> Pomp een 20% (g / g) ethanol oplossing van 3- (trimethoxysilyl) propyl methacrylaat (pH 5 ingesteld met azijnzuur) en 0,25 pl / min gedurende 1 uur. In deze stap wordt de silica capillair met vinylgroepen gefunctionaliseerd teneinde het polymeer monoliet hechten aan het capillair binnenoppervlak. </li><li> Spoelen met aceton en droog in een stikstofstroom en laat overnacht bij kamertemperatuur vóór gebruik. Snijd de capillaire in kortere stukken met een lengte van 20 cm. </li></ol></li><li> Voorbereiding van de monolithische capillaire kolommen <ol><li> Bereid een identieke polymerisatiemengsel als voor de bulk polymeer monoliet (punt 1.1) in een 1 ml glazen flacon met een rubberen septum. Initiator voeg 1% AIBN opzichte van monomeren. Homogeniseren door sonicatie gedurende 10 min. </li><li> Spoel het polymerisatiemengsel met stikstof door het koppelen van een niet-gefunctionaliseerde silica capillaireeen stikstofstroom. <ol><li> Plaats de stikstofstroom capillaire door het rubberen septum van het flesje en dompel deze in het polymerisatiemengsel dat de stikstof door de vloeistoffase borrelt. Laat de flacon dop iets los om overdruk te voorkomen. Zuiveren gedurende 10 min. </li><li> Til de stikstofstroom capillaire van de polymerisatie mengsel aan de bovenruimte van het flesje en sluit stevig de dop. Plaats een gefunctionaliseerd capillair door het septum in het polymerisatiemengsel. De overmaat druk die in het capillaire via stikstof geïnjecteerd in de kopruimte pompt het polymerisatiemengsel door de gefunctionaliseerde capillair. </li><li> Verzamel enkele druppels polymerisatiemengsel uit het effluent van de capillaire zodat deze volledig gevuld is en sluit met een rubber septum. Neem de capillaire uit de flacon zeer zorgvuldig en sluit de inlaat van de capillair met een rubberen septum. </li></ol></li><li> Polymeriseren de mixture in de capillair in een waterbad bij 60 ° C gedurende 6 uur. Kamertemperatuur afkoelen en snijd enkele millimeters van beide uiteinden van het capillair. Verwijder gereageerde monomeren en poriënvormende middelen door spoelen van de kolom met acetonitril onder toepassing van een HPLC-pomp met 3 ul / min gedurende 30 min. Controleer tegendruk van de capillaire kolom. </li></ol></li></ol> 2. Groei van het IJzeren-benzenetrycarboxylate (FeBTC) PCP <ol><li> De groei van de FeBTC MOPH op een Bulk Polymer Monolith voor de karakterisering <ol><li> Maal de eerder gedroogde monoliet met behulp van een mortier en een stamper. </li><li> Dompel 100 mg van de monoliet poeder in 5 ml 2 mM FeCl3 · 6H 2 O in ethanol gedurende 15 min. Vacuum filter met behulp van een nylon filter (0,22 pm) en was het poeder met ethanol. Dompel de monoliet poeder in 5 ml 2 mM 1,3,5-benzeentricarbonzuur (BTC) in ethanol gedurende 15 min. Vacuum filter met behulp van een nylon filter (0,22 pm) en was het poeder met ethanol.</li><li> Herhaal stap nummer 2 naar wens. De groei van de uiteindelijke metaalorganische coating wordt bepaald door het aantal toegepaste cycli. Gewoonlijk worden tussen 10 en 30 cycli uitgevoerd. Bevestig de aanwezigheid van de nieuwe poriën door stikstofadsorptie porosimetrie. Meet de hoeveelheid extra metalen locaties door thermogravimetrische analyse (TGA). </li></ol></li><li> De groei van de FeBTC MOPH op een capillaire monolithische kolom voor de verrijking van fosfopeptiden <ol><li> Met behulp van een spuitpomp. Spoel het capillair monoliet met 2 mM FeCl3 · 6H 2 O in ethanol gedurende 15 min bij 2 gl / min. Wassen met ethanol gedurende 15 min bij 2 gl / min. Spoel het capillair monoliet met 2 mM BTC in ethanol gedurende 15 min bij 2 gl / min. Wassen met ethanol gedurende 15 min bij 2 gl / min. </li><li> Herhaal stap 1 als gewenst. De groei van de uiteindelijke metaalorganische coating wordt gedefinieerd door het aantal cycli uitgevoerd. </li></ol></li></ol> 3. eiwitvertering en Enrichment van fosfopeptiden <ol><li> Eiwitvertering <ol><li> Los 0,5 ml van vetvrije melk in 1 ml water en verdeel het in 200 ul fracties. </li><li> Voor de eiwitvertering voeg 160 ul 1 M ammoniumbicarbonaat en 50 pl 45 mM dithiothreitol om elke fractie, zodat de disulfide bindingen splitsen. Incubeer bij 50 ° C in een thermomixer gedurende 15 min. </li><li> Voeg langzaam 50 ul van een waterige oplossing van 100 mM iodoacetamide, terwijl de oplossing afgekoeld tot kamertemperatuur. Joodaceetamide de vorming van nieuwe disulfidebindingen te voorkomen. </li><li> Incubeer in het donker gedurende 15 minuten bij kamertemperatuur geroerd. Voeg 1 ml gedemineraliseerd water. Voeg 2 ug trypsine en verteren eiwitten in een thermomixer bij 37 ° C gedurende 14 uur. </li><li> Beëindig digestie door aanzuren met 10 ui 1% trifluorazijnzuur, en te plaatsen in de thermomixer gedurende 5 minuten bij kamertemperatuur geroerd. Bewaar de verteerde proteïnen bij -20 ° C. </li></ol></li><li> Verrijking van fosfopeptiden via een capillaire kolom MOPH. <ol><li> Spoel de kolom met 100 pi van een 4: 1 mengsel van acetonitril dat 0,1% trifluorazijnzuur gedurende 10 min bij een stroomsnelheid van 1 pl / min. Pomp de eiwitvertering door de kolom 2 pl / min gedurende 30 min. </li><li> Spoel de niet-gefosforyleerde peptiden opnieuw met een 4: 1 mengsel van acetonitril dat 0,1% trifluorazijnzuur gedurende 10 min bij een stroomsnelheid van 1 pl / min. Wassen met water gedurende 10 min bij een stroomsnelheid van 1 pl / min. </li><li> Elueer fosfopeptiden via een 250 mM pH 7 fosfaatbufferoplossing gepompt met 1 pl / min gedurende 15 min. Verzamel het eluaat in een flesje en ontzouten van de oplossing met behulp van een standaard protocol 19. Bereid een 2 mg / ml 2,5-dihydroxybenzoëzuur te gebruiken als de matrix van de matrix-geassisteerde laser desorptie / ionisatie time-of-flight massaspectrometrie (MALDI-TOF-MS). Getrokken 2 pl van het 2,5-dihydroxybenzoëzuur in de tip om de phosphope eluerenptides en spot ze direct op de MALDI plaat. </li><li> Analyseer de vlekken door MALDI-TOF-MS en regenereren van de kolom grondig spoelen met water en vervolgens methanol. </li></ol></li></ol>

<ol><li>Li, H., Eddaoudi, M., O’Keeffe, M., Yaghi, O. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Design+and+synthesis+of+an+exceptionally+stable+and+highly+porous+metal-organic+framework%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Design and synthesis of an exceptionally stable and highly porous metal-organic framework.</a> Nature. 402, 276-279 (1999).</li>
<li>Kitagawa, S., Kitaura, R., Noro, S. i <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+porous+coordination+polymers%5BTitle%5D)+AND+%22Angew.+Chem.+Int.+Ed%22%5BJournal%5D)">Functional porous coordination polymers.</a> Angew. Chem. Int. Ed. 43, 2334-2375 (2004).</li>
<li>Furukawa, H., Cordova, K. E., O’Keeffe, M., Yaghi, O. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+chemistry+and+applications+of+metal-organic+frameworks%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">The chemistry and applications of metal-organic frameworks.</a> Science. 341, 974(2013).</li>
<li>Ma, S., Zhou, H. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gas+storage+in+porous+metal-organic+frameworks+for+clean+energy+applications%5BTitle%5D)+AND+%22Chem.+Commun%22%5BJournal%5D)">Gas storage in porous metal-organic frameworks for clean energy applications.</a> Chem. Commun. 46, 44-53 (2010).</li>
<li>Li, J. R., Sculley, J., Zhou, H. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Metal-organic+frameworks+for+separations%5BTitle%5D)+AND+%22Chem.+Rev%22%5BJournal%5D)">Metal-organic frameworks for separations.</a> Chem. Rev. 112, 869-932 (2012).</li>
<li>Lee, J., Farha, O. K., Roberts, J., Scheidt, K. A., Nguyen, S. T., Hupp, J. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Metal-organic+framework+materials+as+catalysts%5BTitle%5D)+AND+%22Chem.+Soc.+Rev%22%5BJournal%5D)">Metal-organic framework materials as catalysts.</a> Chem. Soc. Rev. 38, 1450-1459 (2009).</li>
<li>Gu, Z. Y., Yang, C. X., Chang, N., Yan, X. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Metal-organic+frameworks+for+analytical+chemistry%3A+From+sample+collection+to+chromatographic+separation%5BTitle%5D)+AND+%22Acc.+Chem.+Res%22%5BJournal%5D)">Metal-organic frameworks for analytical chemistry: From sample collection to chromatographic separation.</a> Acc. Chem. Res. 45, 734-745 (2012).</li>
<li>Ahmad, R., Wong-Foy, A. G., Matzger, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microporous+coordination+polymers+as+selective+sorbents+for+liquid+chromatography%5BTitle%5D)+AND+%22Langmuir%22%5BJournal%5D)">Microporous coordination polymers as selective sorbents for liquid chromatography.</a> Langmuir. 25, 11977-11979 (2009).</li>
<li>Yang, C. X., Yan, X. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Metal-organic+framework+MIL-101%28Cr%29+for+high-performance+liquid+chromatographic+separation+of+substituted+aromatics%5BTitle%5D)+AND+%22Anal.+Chem%22%5BJournal%5D)">Metal-organic framework MIL-101(Cr) for high-performance liquid chromatographic separation of substituted aromatics.</a> Anal. Chem. 83, 7144-7150 (2011).</li>
<li>Fu, Y. Y., Yang, C. X., Yan, X. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Control+of+the+coordination+status+of+the+open+metal+sites+in+metal-organic+frameworks+for+high+performance+separation+of+polar+compounds%5BTitle%5D)+AND+%22Langmuir%22%5BJournal%5D)">Control of the coordination status of the open metal sites in metal-organic frameworks for high performance separation of polar compounds.</a> Langmuir. 28, 6802-6810 (2012).</li>
<li>Gu, Z. Y., Yan, X. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Metal-organic+framework+MIL-101+for+high-resolution+gas-chromatographic+separation+of+xylene+isomers+and+ethylbenzene%5BTitle%5D)+AND+%22Angew.+Chem.+Int.+Ed%22%5BJournal%5D)">Metal-organic framework MIL-101 for high-resolution gas-chromatographic separation of xylene isomers and ethylbenzene.</a> Angew. Chem. Int. Ed. 49, 1477-1480 (2010).</li>
<li>Chang, N., Gu, Z. Y., Yan, X. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zeolitic+imidazolate+framework-8+nanocrystal+coated+capillary+for+molecular+sieving+of+branched+alkanes+from+linear+alkanes+along+with+high-resolution+chromatographic+separation+of+linear+alkanes%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Am.+Chem.+Soc%22%5BJournal%5D)">Zeolitic imidazolate framework-8 nanocrystal coated capillary for molecular sieving of branched alkanes from linear alkanes along with high-resolution chromatographic separation of linear alkanes.</a> J. Am. Chem. Soc. 132, 13645-13647 (2010).</li>
<li>Yu, L. Q., Xiong, C. X., Yan, X. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Room+temperature+fabrication+of+post-modified+zeolitic+imidazolate-90+as+stationary+phase+for+open-tubular+capillary+electrochromatography%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Chromatogr.+A%22%5BJournal%5D)">Room temperature fabrication of post-modified zeolitic imidazolate-90 as stationary phase for open-tubular capillary electrochromatography.</a> J. Chromatogr. A. 1343, 188-194 (2014).</li>
<li>Fu, Y. Y., Yang, C. X., Yan, X. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Incorporation+of+metal-organic+framework+UiO-66+into+porous+polymer+monoliths+to+enhance+the+liquid+chromatographic+separation+of+small+molecules%5BTitle%5D)+AND+%22Chem.+Commun%22%5BJournal%5D)">Incorporation of metal-organic framework UiO-66 into porous polymer monoliths to enhance the liquid chromatographic separation of small molecules.</a> Chem. Commun. 49, 7162-7164 (2013).</li>
<li>Lin, C. L., Lirio, S., Chen, Y. T., Lin, C. H., Huang, H. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+hybrid+metal-organic+framework-polymeric+monolith+for+solid-phase+extraction%5BTitle%5D)+AND+%22Chem.+Eur.+J%22%5BJournal%5D)">A novel hybrid metal-organic framework-polymeric monolith for solid-phase extraction.</a> Chem. Eur. J. 20, 3317-3321 (2014).</li>
<li>Svec, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Porous+polymer+monoliths%3A+Amazingly+wide+variety+of+techniques+enabling+their+preparation%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Chromatogr.+A%22%5BJournal%5D)">Porous polymer monoliths: Amazingly wide variety of techniques enabling their preparation.</a> J. Chromatogr. A. 1217, 902-924 (2010).</li>
<li>Monolithic HPLC Columns. , Available from: 
 <a target="_blank" href="http://www.phenomenex.com/onyx">http://www.phenomenex.com/onyx</a> (2015).</li>
<li>Bia Separations. , Available from: 
 <a target="_blank" href="http://www.biaseparations.com/">http://www.biaseparations.com/</a> (2015).</li>
<li>Shekhah, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Step-by-step+route+for+the+synthesis+of+metal-organic+frameworks%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Am.+Chem.+Soc%22%5BJournal%5D)">Step-by-step route for the synthesis of metal-organic frameworks.</a> J. Am. Chem. Soc. 129, 15118-15119 (2007).</li>
<li>Shekhah, O., Fu, L., Belmabkhout, Y., Cairns, A. J., Giannelis, E. P., Eddaoudi, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Successful+implementation+of+the+stepwise+layer-by-layer+growth+of+MOF+thin+films+on+confined+surfaces%3A+mesoporous+silica+foam+as+a+first+case+study%5BTitle%5D)+AND+%22Chem.+Commun%22%5BJournal%5D)">Successful implementation of the stepwise layer-by-layer growth of MOF thin films on confined surfaces: mesoporous silica foam as a first case study.</a> Chem. Commun. 48, 11434-11436 (2012).</li>
<li>Saeed, A., Maya, F., Xiao, D. J., Naham-ul-Haq, M., Svec, F., Britt, D. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Growth+of+a+highly+porous+coordination+polymer+on+a+macroporous+polymer+monolith+support+for+enhanced+immobilized+metal+ion+affinity+chromatographic+enrichment+of+phosphopeptides%5BTitle%5D)+AND+%22Adv.+Funct.+Mater%22%5BJournal%5D)">Growth of a highly porous coordination polymer on a macroporous polymer monolith support for enhanced immobilized metal ion affinity chromatographic enrichment of phosphopeptides.</a> Adv. Funct. Mater. 24, 5797-5710 (2014).</li>
<li>Krenkova, J., Lacher, N. A., Svec, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Control+of+selectivity+via+nanochemistry%3A+Monolithic+capillary+column+containing+hydroxyapatite+nanoparticles+for+separation+of+proteins+and+enrichment+of+phosphopeptides%5BTitle%5D)+AND+%22Anal.+Chem%22%5BJournal%5D)">Control of selectivity via nanochemistry: Monolithic capillary column containing hydroxyapatite nanoparticles for separation of proteins and enrichment of phosphopeptides.</a> Anal. Chem. 82, 8335-8341 (2010).</li>
<li>Jabeen, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Silica-lanthanum+oxide%3A+Pioneer+composite+of+rare-earth+metal+oxide+in+selective+phosphopeptides+enrichment%5BTitle%5D)+AND+%22Anal.+Chem%22%5BJournal%5D)">Silica-lanthanum oxide: Pioneer composite of rare-earth metal oxide in selective phosphopeptides enrichment.</a> Anal. Chem. 84, 10180-10185 (2012).</li>
<li>Hussain, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functionalized+diamond+nanopowder+for+phosphopeptides+enrichment+from+complex+biological+fluids%5BTitle%5D)+AND+%22Anal.+Chim.+Acta%22%5BJournal%5D)">Functionalized diamond nanopowder for phosphopeptides enrichment from complex biological fluids.</a> Anal. Chim. Acta. 775, 75-84 (2013).</li>
<li>Aprilita, N. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Poly%28glycidyl+methacrylate%2Fdivinylbenzene%29-IDA-FeIII+in+phosphoproteomics%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Proteom.+Res%22%5BJournal%5D)">Poly(glycidyl methacrylate/divinylbenzene)-IDA-FeIII in phosphoproteomics.</a> J. Proteom. Res. 4, 2312-2319 (2005).</li>
<li>Lo, C. Y., Chen, W. Y., Chen, C. T., Chen, Y. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+enrichment+of+phosphopeptides+from+tryptic+digests+of+proteins+using+iron+oxide+nanocomposites+of+magnetic+particles+coated+with+zirconia+as+the+concentrating+probes%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Proteom.+Res%22%5BJournal%5D)">Rapid enrichment of phosphopeptides from tryptic digests of proteins using iron oxide nanocomposites of magnetic particles coated with zirconia as the concentrating probes.</a> J. Proteom. Res. 6, 887-893 (2007).</li>
<li>Aryal, U. K., Ross, A. R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enrichment+and+analysis+of+phosphopeptides+under+different+experimental+conditions+using+titanium+dioxide+affinity+chromatography+and+mass+spectrometry%5BTitle%5D)+AND+%22Rapid+Commun.+Mass.+Spectrom%22%5BJournal%5D)">Enrichment and analysis of phosphopeptides under different experimental conditions using titanium dioxide affinity chromatography and mass spectrometry.</a> Rapid Commun. Mass. Spectrom. 24, 219-231 (2010).</li>
<li>Select Iron Affinity Gel Technical Bulletin. , Available from: 
 <a target="_blank" href="https://www.sigmaaldrich.com/content/dam/sigma-aldrich/docs/Sigma/Bulletin/p9740bul.pdf">https://www.sigmaaldrich.com/content/dam/sigma-aldrich/docs/Sigma/Bulletin/p9740bul.pdf</a> (2015).</li>
</ol>

De auteurs hebben niets te onthullen.

Het oorspronkelijke polymeer monoliet bevat carbonzure functionele groepen kunnen binden aan metalen. Het coördineren de initiële metaalplekken op het oorspronkelijke materiaal, kunnen wij een PCP coating (figuur 1A) groeien, waarin een aantal bijkomende metaalsites vormen een microporeus netwerk. Dit maakt de gepresenteerde MOPH materialen aantrekkelijke voor extractie en zuiveringsprocedures wanneer metallische species zijn betrokken, zoals de geïmmobiliseerde metaalion affiniteitschromatografie (IMAC...

Poreuze polymeren coördinatie (PCP) coördinatieverbindingen zijn gebaseerd op metaalcentra toegevoegd door organische liganden met herhalende eenheden coördinatie uitstrekt in 1, 2 of 3 dimensies die amorf of kristallijn 1-3 kan zijn. De laatste jaren is deze klasse van poreuze materialen veel aandacht getrokken vanwege hun hoge porositeit, voor chemische tunability en de stabiliteit. PCPs zijn onderzocht voor een waaier van toepassingen, waaronder gasopslag, gasscheiding en katalyse 3-6, en zeer recent zijn de eerste analytische toepassingen van PCP is beschreven 7. Vanwege hun verbeterde chemische functionele en hoge porositeit PCP zijn gericht voor hun enorme potentieel voor het verbeteren van zuiveringsprocessen en chromatografische scheidingen en een aantal verslagen over dit onderwerp gepubliceerd 13/07. De prestaties van PCPs is momenteel op een equivalent niveau met bestaande chromatografische materialen waarschijnlijk te wijten aan een snelle diffusie door grote interparticle holten in gepakte bedden van deze stoffen als gevolg van hun meestal onregelmatig gevormde morfologie van de deeltjes of kristallen. Dit onregelmatig verdeelde pakking leidt tot een lagere dan verwachte prestatie, evenals hoge kolomtegendruk en ongewenste piekvorm morfologieën 14,15. Om het probleem van snelle diffusie lossen door de holtes tussen de deeltjes en tegelijkertijd verbeteren de prestaties van PCPs voor analytische toepassingen, het ontwikkelen van een hybride materiaal op basis van een macroporeus polymeer monoliet 16 dat de PCP op de oppervlakte van de macroporiën bevat zou wenselijk. Polymer monolieten zijn op zichzelf staande, uit één stuk materiaal dat convectiestroom kan dragen via hun poriën, waardoor ze een van de meest efficiënte alternatieven voor verpakkingen hiel en zijn met succes gecommercialiseerd door verscheidene c<html> ompanies 17,18. Poreuze polymere monolieten zijn gewoonlijk gebaseerd op de polymerisatie van een monomeer en een verknopingsmiddel in aanwezigheid van porogenen, die typisch binaire mengsels van organische oplosmiddelen. De verkregen monolithische materialen hebben een microglobular structuur en een hoge porositeit en permeabiliteit stromen. Een eenvoudige benadering van deze materialen te verenigen om een ​​polymeer te bereiden monoliet die een PCP is gebaseerd op de directe toevoeging van as-gesynthetiseerde huisartsen in het polymerisatiemengsel van de monoliet. Deze aanpak resulteerde in PCPs meestal begraven in een polymeer steiger, en niet actief zijn voor de verdere toepassing van de uiteindelijke materiaal 14,15. Een andere synthetische aanpak is duidelijk noodzakelijk om, bijvoorbeeld, de ontwikkeling van uniforme films PCPs of kristallijn metaal-organic frameworks (MOFs) waar de meerderheid van de poriën aanwezig in het kristal zijn vanaf de macroporiën van het polymeer monoliet. t &quot;&gt; Hierin beschrijven we een eenvoudig protocol voor het bereiden van een metaal-organisch hybride polymeer materiaal (MOPH) op basis van een macroporeuze polymere drager met geschikte functionele groepen voor hechting van PCP, die gemakkelijk kan worden geïmplementeerd als een op zichzelf staand enkelvoudige -piece polymere monoliet in een kolom formaat met optimale eigenschappen voor doorstroom toepassingen. Het polymeer synthese procedure wordt gevolgd bij gewone kamertemperatuur oplossing-gebaseerde &#160; Om een PCP coating groeien op het inwendige oppervlak van de poriën van de monoliet 19-20. Als eerste voorbeeld beschrijven we de bereiding van een ijzer (III) benzenetricarboxylate (FeBTC) coördinatie polymeerfilm bij een macroporeuze poly (styreen-divinylbenzeen-methacrylzuur) monoliet. Deze werkwijze is effectief voor het bereiden van bulk poeders en capillaire kolommen en beschreven protocol gemakkelijk uitvoerbare andere PCP. Als voorbeeld van het potentieel van MOPHs als functionele materialen voor stroming-through betreft, wordt nu toegepast ontwikkelden FeBTC MOPH die een dichte bekleding van Fe (III) centra fosfopeptiden verrijken van gedigesteerde eiwitmengsels benutten van de bindingsaffiniteit van fosfopeptiden tot Fe (III) binnen. De ontwikkelde protocol 21 bestaat uit drie hoofdonderdelen: Voorbereiding van de macroporeuze organisch polymeer monoliet ondersteuning; groei van de PCP coating op het oppervlak van de poriën van de monoliet; aanvraag voor de verrijking van fosfopeptiden.

<table><tbody><tr><td>Polyimide-coated capillaries</td><td>Polymicro Technologies</td><td>TSP100375</td><td>100 &mu;m i.d.</td></tr><tr><td>3-(trimethoxysilyl)propyl methacrylate, 98%</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>440159</td><td></td></tr><tr><td>Styreen, 99%</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>W323306</td><td>Technische kwaliteit</td></tr><tr><td>Divinylbenzeen, 80%</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>414565</td><td></td></tr><tr><td>Methacrylzuur, 98%</td><td>Mallinckrodt</td><td>MK150659</td><td></td></tr><tr><td>Tolueen, &ge;99,5%</td><td>EMD chemicals</td><td>MTX0735-6</td><td></td></tr><tr><td>Iso-octane, &ge;99,5%</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>650439</td><td></td></tr><tr><td>2,2'-azobisisobutyronitril, 98%</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>441090</td><td></td></tr><tr><td>Aluminiumoxide (basisch alumina)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>199443</td><td></td></tr><tr><td>IJzer (III) chloride hexahydraat, 97%</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>236489</td><td></td></tr><tr><td>1,3,5-benzeendicarbonzuur, 95%</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>482749</td><td></td></tr><tr><td>Acetonitril, &ge;99,5%</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>360457</td><td></td></tr><tr><td>Ammoniumbicarbonaat, &ge;99,5%</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>9830</td><td></td></tr><tr><td>Trifluorazijnzuur, &ge;99%</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>302031</td><td></td></tr><tr><td>Ethanol, &ge;99,8%</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>2854</td><td></td></tr><tr><td>Iodoacetamid, &ge;99%</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>I1149</td><td></td></tr><tr><td>Dithiothreitol, &ge;99%</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>43819</td><td></td></tr><tr><td>Monobasisch natriumfosfaat dihydraat, &ge;99%</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>71505</td><td></td></tr><tr><td>Dibasisch natriumfosfaat dihydraat, &ge;99%</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>71643</td><td></td></tr><tr><td>Fosforzuur, &ge;85%</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>438081</td><td></td></tr><tr><td>2,5-dihydroxybenzoëzuur, &ge;99%</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>85707</td><td></td></tr><tr><td>Trypsine</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T8003</td><td>Runderpancreas</td></tr><tr><td>&beta;-caseïne</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C6905</td><td>Rundermelk</td></tr><tr><td>ZipTip pipette tips</td><td>Merck Millipore</td><td>ZTC18S096</td><td>C18 hars</td></tr></tbody></table>

voorbereiding van de zeer poreuze coordination polymer coatings op macroporeuze polymer monoliths voor enhanced verrijking van fosfopeptiden

Preparation of Highly Porous Coordination Polymer Coatings on Macroporous Polymer Monoliths for Enhanced Enrichment of Phosphopeptides

We beschrijven een protocol voor de bereiding van hybride materialen op basis van zeer poreuze coördinatiepolymeercoatings op het interne oppervlak van macroporeuze polymeermonolithen. De ontwikkelde aanpak is gebaseerd op de bereiding van een macroporeus polymeer dat carboxylzuurfunctionele groepen bevat en de daaropvolgende stapsgewijze, oplossingsgebaseerde gecontroleerde groei van een laag van een poreus coördinatiepolymeer op het oppervlak van de poriën van de polymeermonolith. Het bereide metaal-organische polymeerhybride heeft een hoge specifieke microporeuze oppervlakte. De hoeveelheid ijzer(III)-plaatsen wordt verhoogd door metaal-organische coördinatie op het oppervlak van de poriën van het functionele polymeerondersteuning. De toename van metaalplaatsen is gerelateerd aan het aantal herhalingen van het coatingproces.
Het ontwikkelde bereidingsschema is gemakkelijk aan te passen aan een capillaire kolomformaat. Het functionele poreuze polymeer wordt bereid als een zelfstandige, enkele blok poreuze monolith binnen de capillair, waardoor een doorstromende scheidingsinrichting met uitstekende doorstromingspermeabiliteit en bescheiden terugdrukking ontstaat. De metaal-organische polymeerhybride kolom toonde uitstekende prestaties voor de verrijking van fosfopeptiden uit verteerde eiwitten en hun daaropvolgende detectie met behulp van matrix-ondersteunde laserdesorptie/ionisatie tijd-vlieg massaspectrometrie. Het gepresenteerde experimentele protocol is zeer veelzijdig en kan gemakkelijk worden geïmplementeerd voor verschillende organische polymeerondersteuningen en coatings met een groot aantal poreuze coördinatiepolymeren en metaal-organische frameworks voor meerdere zuiverings- en/of scheidingstoepassingen.

Een schematische illustratie van de PCP groei op het poriënoppervlak van het organische polymeer monoliet wordt getoond in figuur 1. In deze figuur illustreren we de initiële Fe (III) atomen op het poriënoppervlak van het oorspronkelijke polymere monoliet gecoördineerd carboxyl- functionele groepen behouden . De protocol hierin beschreven additionele organische ligand en Fe (III) -ionen worden toegevoegd aan het oppervlak vormen een poreus coördinatienetwerk binnen de polymere monoliet. Figuur 1...

Een procedure voor de bereiding van poreuze hybride scheidingsmedia, bestaande uit een macroporeuze polymeermonoliet intern gecoat met een microporeuze coördinatiepolymeer met een groot oppervlak, wordt gepresenteerd.

Voorbereiding van de zeer poreuze Coordination Polymer Coatings op Macroporeuze Polymer Monoliths voor Enhanced Verrijking van fosfopeptiden

We describe a protocol for the preparation of hybrid materials based on highly porous coordination polymer coatings on the internal surface of macroporous ...

Het algemene doel van het volgende experiment is het prepareren van een nieuw dragermateriaal met verbeterde prestaties bij de selectieve extractie van fosfopeptiden. Dit wordt bereikt door de juiste preparatie van een poreuze polymere capillaire monoliet met geschikte functionele groepen. Eerst wordt een metaalsoort geïmmobiliseerd op de functionele groepen van een polymere monoliet, waardoor de drager selectief wordt voor de extractie van fosfopeptiden.Vervolgens wordt de stapsgewijze groei van meerdere lagen van het metaal-organische raamwerk uitgevoerd om het aantal metaalplaatsen te vergroten, waardoor de selectiviteit voor fosfopeptiden toeneemt. De resultaten tonen een verbeterde selectiviteit voor de extractie van fosfopeptiden uit eiwitdigesten op basis van matrix-assisted laser desorption ionization, time-of-flight massaspectrometrie. De verrijking van fosfopeptiden gebeurt gewoonlijk via metaalaffiniteitschromatografie, wat wordt uitgevoerd op conventionele silicadeeltjes of polymeerdeeltjes die in een chromatografische kolom zijn gepakt.Ons materiaal combineert de voordelen van een macroporeuze polymere monoliet, die goede massatransporteigenschappen bezit, met de hoge

preparation-highly-porous-coordination-polymer-coatings-on

Research

JoVE Journal

Chemistry

Scheikunde

We hebben plasma geassisteerde chemische damp depositie van dunne films, variërend van een paar nm tot enkele 100 nm op de nano-deeltjes van verschillende materialen te storten. We vervolgens etsen kernmateriaal holle nanocapsules waarvan permeabiliteit wordt geregeld door de dikte van het reservoir te produceren. We karakteriseren de doorlaatbaarheid van deze coatings aan kleine opgeloste stoffen en aantonen dat deze barrières kunnen vertraagde afgifte van het kernmateriaal te bieden over...

Encapsulation en permeabiliteit Kenmerken van plasma-gepolymeriseerde holle deeltjes

This video demonstrates titanium dioxide-based enrichment of phosphopeptides extracted from prostate tumor tissue. These enriched phosphopeptides can be used for downstream applications such as protein characterization to understand cell signaling pathways involved in prostate cancer progression.

Titanium Dioxide-based Enrichment of Phosphopeptides: A Method for the Selective Isolation of Phosphopeptides from Peptide Library

We rapporteren protocollen voor het “polymeriseren” van verschillende soorten polymeer-ingekapselde metaal-nanodeeltjes tot lange ketens van “homo-“ en “co-polymeren”.

Met behulp van polystyreen<em&gt; Block</em&gt; Poly (acrylzuur) -gecoate Metal Nanodeeltjes als monomeren voor hun homo- en co-polymerisatie

In dit artikel beschrijven we de interfaciale synthese van geconjugeerde microporeuze polymeren (CMP) op opofferende substraten, en de oplossing van het substraat voor de bereiding van vrijstaande CMP-nanomembranen. Bovendien zullen we beschrijven hoe de kwetsbare nanomembranen kunnen worden overgedragen naar andere substraten.

Layer-by-layer synthese en de overdracht van Vrijstaande geconjugeerde Microporous Polymer Nanomembranes

Cel-adhesiviteit is essentieel voor veel benaderingen in biomateriaalonderzoek en weefselengineering. Er wordt een stapsgewijze techniek gepresenteerd die gebruik maakt van natte chemie voor de oppervlaktemodificatie van het belangrijke polymeer PTFE met peptiden.

Natte Chemie en Peptide immobilisatie op Polytetrafluoroethyleen voor betere Cel-adhesie

De synthese van peptide polyamine gebaseerde amfifielen (PPA) is een grote uitdaging wegens de aanwezigheid van meerdere amine stikstofatomen, waarvoor oordeelkundig gebruik om groepen te maskeren deze reactieve functionaliteiten te beschermen. In deze paper beschrijven we een facile methode voor de bereiding van deze nieuwe klasse van zelfassemblerende moleculen.

Facile Protocol voor de synthese van het zelf monteren van Peptide Polyamine gebaseerde amfifielen (PPA) en verwante biomaterialen

Dit protocol beschrijft een procedure om uitpakken en verrijken van phosphopeptides van prostaatkanker cellijnen of weefsels voor een analyse van de phosphoproteome via massa spectrometrie gebaseerde proteomics.

Verrijking van de Phosphopeptide in combinatie met kwantitatieve Label-vrije Spectrometrie van de massa te onderzoeken van de Phosphoproteome in prostaatkanker

Een gedetailleerd protocol wordt beschreven voor de scheiding, identificatie en karakterisering van proteoforms in EiwitSteekproeven met behulp van capillaire zone elektroforese-electrospray ionisatie-tandem massaspectrometrie (CZE-ESI-MS/MS). Het protocol kan worden gebruikt voor de hoge-resolutie karakterisatie van proteoforms in simple EiwitSteekproeven en de grootschalige identificatie van proteoforms in complexe Proteoom monsters.

Grootschalige topdown Proteomics met behulp van capillaire Zone elektroforese Tandem massaspectrometrie

Een protocol voor de bereiding van poly (pentafluorfenyl acrylaat) (poly(PFPA)) geënt silica kralen wordt gepresenteerd. Vervolgens wordt het functionalized oppervlak van poly(PFPA) geïmmobiliseerd met antilichamen en met succes gebruikt voor de scheiding van de eiwitten door middel van immunoprecipitation.

Voorbereiding van Poly(pentafluorophenyl acrylate) matiemaatschappij SiO2 parels eiwitreiniging

Een protocol wordt gepresenteerd voor de synthese van informatie-gecodeerde peptoid oligomeren en voor de sequentie-gerichte zelfassemblage van deze peptoids in moleculaire ladders met behulp van amines en aldehyden als dynamische covalente reactant paren en Lewis zure zeldzame aarde metalen triflates als multi-role reagentia.

Synthese van informatiedragende Peptoids en hun reeks-geleide Dynamische Covalent Zelfassemblage

Deze studie maakt met succes gebruik van MIL-96(Al) metaal-organische raamwerkdeeltjes (MOF) om Pickering-emulsies te stabiliseren, die dienen als templates voor de vorming van mechanisch robuuste, hiërarchisch poreuze monolithische materialen. Deze methode maakt schaalbare MOF-vormgeving mogelijk terwijl de kristalintegraal behouden blijft. Het afstemmen van de formulering is essentieel voor het beheersen van de poriegrootte, onderlinge verbondenheid, permeabiliteit en robuustheid.

Assemblage van poreuze monolithische materialen met behulp van een Pickering-emulsiestrategie gestabiliseerd door metaal-organische raamwerk-deeltjes (MOF-deeltjes)

Leer de voorbereiding van zeer poreuze coördinatiepolymeercoatings op macroporeuze polymermonolieten voor verbeterde verrijking van fosfopeptiden. Deze methode verhoogt de selectiviteit door stapsgewijze groei van metaalorganische raamwerklagen.

Voorbereiding van de zeer poreuze Coordination Polymer Coatings op Macroporeuze Polymer Monoliths voor Enhanced Verrijking van fosfopeptiden (Video) | JoVE Journal

Voorbereiding van de zeer poreuze Coordination Polymer Coatings op Macroporeuze Polymer Monoliths voor Enhanced Verrijking van fosfopeptiden

Meer video's verkennen