Name: 태아 마우스 심장 혈관 이미징 높은 주파수 초음파 (30/45 m h Z) 시스템을 사용 하 여 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-05-05T12:30:00.000+00:00
Duration: 7 min 34 s
Description: 배우세요 고주파 초음파를 이용한 태아 마우스 심장 혈관 이미징 방법을 통해 선천성 심장 결함을 비침습적으로 실시간 모니터링하고 심장 형태와 혈류 지수를 정밀 분석하는 기술을 익히세요.

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우리는 동물 생리학 코어, 기술 지원 및 Vevo 2100 초음파 biomicroscopy (UBM) 시스템에 대 한 오픈 액세스를 제공 하기 위한 UCLA에서 분자 의학의 감사. 이 연구는 NIH/아동 건강 연구 센터 (5K12HD034610/K12), UCLA-어린이 디스커버리 연구소와 오늘과 내일 아 이들의 기금에 의해 지원 되었다 그리고 M. 성격은 데이비드 Geffen 학교의 의학 연구 혁신 상을.

캘리포니아 대학, 로스 앤젤레스, 동물 관리 및 사용 위원회는이 프로토콜에 표시 된 모든 절차를 승인 했습니다. 실험은 활성 동물 프로토콜 승인 기관 동물 관리 및 사용 위원회의 캘리포니아 대학, 로스 앤젤레스, 캘리포니아, 미국에서 진행 중인 연구의 일환으로 실시 되었다. 동물 처리 및 치료 관리 및 실험 동물의 사용에 대 한 가이드의 기준에 따 랐 다.
1. 높은 주파수 초음파 이미징 시스템 준비
<ol><li>초음파 이미징 시스템 및 생리학 모니터링 장치를 켭니다.</li>
	<li>30/45 MHz 트랜스듀서를 연결 합니다.</li>
	<li>그것의 홀더 이미징 플랫폼 근처에 해당 스캔 헤드를 놓습니다.</li>
	<li>심장 측정 프로그램 옵션을 선택 합니다.</li>
	<li>초음파 젤 37 ° c 설정 미리 데우는 컨테이너에 거꾸로 하는 장소</li>
	<li>마 취에 대 한 적절 한 배관 시스템을 확인 하 고 산소와 isoflurane 수준을 확인 합니다.</li>
	<li>이미징 플랫폼과 작업 영역을 치료.</li>
	<li>일정 온도 유지 하기 위해 이미징 플랫폼의 열 수준 및 댐의 심장 박동을 설정 합니다.</li>
</ol>2. 임신 마우스 준비
<ol><li>마 취 유도 실에서 임신 마우스 (C57/BL6) 댐을 놓습니다.</li>
	<li>마 취를 유도 사용 하 여 지속적으로 100% 산소 (100% O2) 유도 실에서 200 mL/min의 유량에 섞인 inhalational isoflurane (isoflurane 2%-3%)를 전달.</li>
	<li>Sedated 동물 부정사 위치에 이미징 플랫폼에 전송.</li>
	<li>안 면 마 취 튜브 시스템 제공 isoflurane (1.0-1.5%)에 연결을 사용 하 여 정상 상태 진정 섞인 100% O2 200 mL/min에서 제공 합니다. 주의: 용기 집합을 포함 하는 숯 필터를 갖춘 환기 시스템을 사용 하 여 마 취 가스의 누설을 제어 합니다.</li>
	<li>모성 심장 및 호흡 속도 지속적으로 모니터링을 달성 하기 위해 전극 젤의 신청 후 부드럽게 임베디드 electrocardiographic 전극에 사지를 테이프.</li>
	<li>(50 비트/분 (bpm) + 450)의 평균 심장 박동을 유지 하기 위해 isoflurane 수준을 조정 합니다.</li>
	<li>37.0 ° C ± 0.5 ° c.의 범위 내에서 체온을 유지 체온과 생리학 컨트롤러 단위에 표시 되 고 심장 박동을 모니터링 합니다.</li>
	<li>Sedated 마우스 이미징 절차에 걸쳐 마다 15 분의 생체 신호를 기록 합니다.</li>
	<li>마우스의 자세, 심장 박동, 그리고 pinches 발가락에 대 한 응답을 평가 하 여 마 취의 정도 평가 합니다.</li>
	<li>눈 건조 및 각 막 손상을 방지 하기 위해 안과 밤 (각 눈에 1 방울)을 적용 합니다.</li>
	<li>초음파 감쇄를 최소화 하기 위해 depilatory 크림을 사용 하 여 더 낮은 사지에 중순 가슴 수준에서 모피를 제거 합니다. 습식 및 건식 거 즈를 교체 하 여 응용 프로그램 손상을 방지 하기 위해 피부에 패치 후 크림 1-1.5 분을 제거 합니다.</li>
</ol>3. 배아 식별
<ol><li>복 부 벽은 태아를 찾아서 그들을 밖으로 확산을 부드럽게 만져</li>
	<li>댐의 복 부에 각 배아를 주석 하 고 마커를 사용 하 여 그들의 이전 후부 및 등 쪽 복 부 방향을 정의 합니다.</li>
	<li>Sedated 댐의 자 궁 경부를 사용 하 여 랜드마크로. L1, L2, L 3, 왼쪽 및 오른쪽 자 궁 뿔에 태아 레이블 등 (왼쪽)와 R1, R2, R3, 등 (오른쪽), 각각 (그림 1A). 주의:는 태아를 강제로 확산 하지 마십시오. 각 담가에 1-2 태아는 다른 사람, 그들의 위치 및 이미징 신뢰할 수 없는 만드는 겹칠 수 있습니다. 분석에서이 태아를 제외 합니다.</li>
</ol>4. 태아 심장 시각화 및 주석
<ol><li>복 부에 미리 데워 진된 초음파 젤을 적용 하 고 거품 형성을 피하기 위해 신중 하 게 그것을 확산. 스캔 이미지의 영역에 젤의 추가 금액을 추가 합니다.</li>
	<li>그것의 기계적인 보유자에 초음파 프로브를 놓고 두꺼운 젤 레이어 검색 B 모드 (그림 1)를 사용 하 여 뛰는 심장에 대 한 찾는 동안 접촉 하 게 피부 쪽으로 점차적으로 그것을 동원 합니다.</li>
	<li>2 차원 이미지를 스캔 B 모드 버튼을 클릭 합니다. 첫 번째 태아는 오른쪽 또는 왼쪽된 자 궁 경적에 위치를 식별 하 고 각각 R1 또는 L1로 표시 하는 랜드마크로 방광을 사용 합니다.</li>
	<li>실시간으로 개별 태아의 오른쪽 및 왼쪽 방향 수평 평면에 이미징 플랫폼을 이동 하 여 확인 합니다. 랜드마크 (그림 1B, 비디오 1)로 서 주 둥이, 팔, 다리 및 척추를 주석을 꼬리 머리에서 스캔.</li>
	<li>뛰는 심장 시각화 하 고 주석이 왼쪽된 심 실 (LV)와 우 심 실 (RV). 심장 시각화를 최적화 하기 위해 사용 색 도플러 모드 (그림 1 C-G, 동영상 1-2).</li>
	<li>보기-parasternal 짧은 축를 스캔 B 모드 버튼을 클릭 LV와 RV 데이터 수집 프레임의 센터에 그들의 최대 직경에 표시 됩니다. 라이브 영상 (그림 1B-C)을 시작 합니다.</li>
	<li>경도 4 챔버 보기 (그림 1D)를 비행기를 검색에 대해 마우스의 방향을 변경 합니다. 첫째, 심 방, interventricular 심장, 왼쪽 및 오른쪽 유출 책자 등 심장의 나머지 구조를 식별 합니다. 다음, 그들의 최대 직경에 표시 되는 심 실 및 심 방 실 있다. 이미지 수집을 시작 합니다.</li>
	<li>최종 분석에서 최적 비, 간접 이미지를 제외 합니다. 10의 최소 연속 녹음 'Cineloops'를 Cini 클릭 기록된 이미지 저장 후 s.</li>
</ol>5. 태아 심 박수 및 심 실 기능 평가
<ol><li>4 개의 챔버 비행기 (비디오 3)에서 심장 이미지를 스캔 M 모드 버튼을 클릭 합니다.</li>
	<li>모든 태아의 이미지 작업이 완료 되 면 분석에 대 한 기록의 목록 보기</li>
	<li>최종 분석에서 최적 비, 간접 이미지를 제외 합니다.</li>
	<li>측정 벽 두께와 심장 (LVID, d;에서 왼쪽/오른쪽 심 실 내부 직경 분석 버튼을 클릭 RVID, d)와 systole (LVID, s; RVID, s), 그림 2와 같이.</li>
	<li>각을 재생 하 여 평균 태아의 심장 박동 기록 추적 하 고 계산 하는 다음과 같은 흐름에 하나의 흐름 주기의 측정 주기 (인접 한 봉우리 사이의 간격) M 모드를 결정 합니다.</li>
	<li>평균 심장 박동 (그림 2)를 얻기 위해 여러 측정 (추적 당 적어도 5)를 수행 합니다.</li>
	<li>왼쪽된 심 실 내부 확장기 직경 (LVID, d) 사이의 심장 주기 끝 systole (LVID, s)에서 왼쪽된 심 실 내부 직경 시간적 변화를 측정 합니다. 다음 분수 단축 백분율 (FS %)를 다음과 같이 계산: FS % [(LVID,d-LVID,s)/LVID, d =] x100.</li>
	<li>평균 FS % 값을 얻기 위해 여러 측정 (추적 당 적어도 5)를 수행 합니다.</li>
</ol>6. 구급 흐름 매개 변수를 평가
<ol><li>수집의 각도 분야 60o조정 합니다. 45-MHz 변환기를 사용 하 여 2 차원 4 챔버 영상 평면에서 펄스 파 도플러 측정을 수행 하려면 도플러 클릭 합니다.<ol>
<li>먼저, 오른쪽 유출 관을 식별 하 고 폐 동맥의 분기 시각화. 다음으로 폐와 대동맥 밸브 (그림 3A, 비디오 4) 통해 흐름 패턴을 얻기 위해 펄스 파 도플러 단추를 클릭 합니다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>펄스 파 도플러 추적, 최대 수축 기 속도 (PkV), 배출 시간 (동부 표준시), (에서), 가속 시간 등에서 폐 흐름 측정을 가져옵니다.</li>
	<li>(오른쪽) 그림 3A 에서 같이 평균 측정을 얻기 위해 여러 측정 (추적 당 적어도 5)를 수행 합니다.</li>
	<li>AT 계산 / 외 각에 대 한 유출 책자 patency의 지표로 서 밸브를 유출 비율과 혈액 흐름.</li>
	<li>펄스 파 도플러를 사용 하 여 2 차원 꼭대기 4 챔버 뷰에서 mitral 및 대동맥 흐름 패턴을 얻을로 이동 합니다. 먼저, 왼쪽된 심 방 및 좌 심 실 챔버를 식별 합니다. 그런 다음 펄스 파 도플러 샘플 볼륨을 (A) (그림 3B)24,25mitral 유입 도플러 패턴 및 측정 초기 확장기 속도 (E)와 심 방 수축 속도의 기록에 대 한 놓습니다.</li>
	<li>대동맥 도플러 제트 패턴을 얻기 위해 도플러 샘플 볼륨을 조정 합니다. 대동맥 도플러 제트기 (오른쪽) 그림 3B 에서 같이 가속 (에서) 시간과 배출 시간 (동부 표준시)을 측정 하기 위해 추적 (비디오 5)를 사용 하 여</li>
</ol>7. 평가 Feto Placental 축
<ol><li>컬러 도플러 검사를 사용 하 여 45의 트랜스듀서 (그림 4A)를 사용 하 여 자 궁 동맥 및 feto 태 반 혈관 트리 시각화.</li>
	<li>태아 복 부에서 코드 종료 직후 탯, 양수 내 세그먼트에 탯 줄 혈관 (두 동맥과 1 개의 정 맥)를 식별 합니다.</li>
	<li>장소 펄스 파 도플러 샘플 볼륨 탯 줄 동맥 흐름 패턴 (그림 4A)를.</li>
	<li>(에서), 방출 시간 (동부 표준시), 가속 시간을 포함 한 혈관 피크 흐름 매개 변수를 측정 하 고 흐름 속도 끝 systole (PkV, s)에서 피크 펄스 파 도플러 검사 기록 (그림 4B)를 사용 하 여.</li>
	<li>태아의 움직임과 모성 호흡 운동, 각 선박에 대 한 평균 최고 속도 측정 하의 부재에서 각 선박에서 5 연속 파형을 얻을.</li>
	<li>다음 배아를 진행 합니다.</li>
</ol>8. 후 이미징 동물 모니터링
<ol><li>이미징 프로세스의 완료 후 isoflurane 컨테이너를 해제 합니다.</li>
	<li>계속 복구 단계 동안 체온, 호흡 속도 심장 박동을 모니터링 합니다.</li>
	<li>댐 시작 자발적인 움직임은 안 면 및 연결된 배관 시스템을 제거 합니다.</li>
	<li>적절 한 주거에 댐을 반환 하 고 표준 기관 수술 후 프로토콜에 따라 관찰을 계속.</li>
	<li>정상적인 활동의 전체 재개 시간을 문서화 합니다.</li>
</ol>9. 성능 요구 사항 및 기술 고려 사항
<ol><li>생체 신호 및 생리 적 매개 변수에 장시간된 마 취의 부작용을 피하기 위해 약 1 h ~ 8 태아에 대 한 처리 시간을 제한 합니다.</li>
	<li>이미지 수집 및 흐름 패턴 짧은 시간 프레임에 추적에 대 한 기술을 최적화 하 8-10 임신 쥐와 함께 훈련을 완료 합니다.</li>
</ol>

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</ol>

관심 없음 충돌 선언.

심장 혈관 기형 및 질병 실질적으로 유전 요인과 환경 요소19에 의해 좌우 된다. 우리 이전 두 번째 임신의 feto 태 반 순환 흐름 및 태아 심장 기능9중 시작 모성 열 량 제한의 상당한 영향을 설명 했다.
태아 저 산소 증은 대단히 feto placental 생리학 및 순환 시스템에 영향을 미칠 수 있습니다 태아 개발 중 또 다른 일반적인 스트레스 요소 이다. 태아 hypoxia 노출의 영향 출생 후 생활에 불 쌍 한 perinatal 적응 선도 CHD의 맥락에서 더 깊은 있을 수 있습니다. 비정상적인 심장 박동수와 심장 인덱스가이 연구에서 발견 심장 스트레스와 변경 된 태 반 순환 생리학, 실제로 중요 한 지표 이며 따라서 발달 결함을 탐지 하기 위한 필수적인 기본 요소를 구성 하 고 수 더 발음 되 태아에 hypoxic 필연적인 hemodynamic 변경 스트레스 초기 심장 마비로 이어...

심장의 선 천 성 기형의 조기 심장 개발 하는 동안 발생 하는 다른 유형의 구조적 결함이 있습니다. 운영 절차의 현재 기술 진보는 CHDs1,2유아의 생존 율에 상당한 개선을 이끌어 냈다. 그러나, 삶의 질입니다 종종 장기간된 입원을 필요 손상 된 보조 외과 수리 절차1,2,3,,45을 벌였다. CHDs의 기본 분자 메커니즘의 태아 기 탐지 계획 초기 개입, 새로운 예방 전략을 실시 하 고 평생 결과6,7을 개선 하기 위해 결정적 이다.
여러 유전과 환경 요인 CHDs 병에 연루 되어, 비록 unmet 필요가 개선 진단, 치료, 그리고 예방 전략1,8,9 남아는 인과 관계를 설정 ,10,,1112. 또한, 미래의 조사11,12에 대 한 새로운 장소 열립니다 utero에 스트레스 요인과 epigenetic 한정자의 역할을 검토. 지난 10 년간 실제로 차세대 시퀀싱 기술 등 단일 염기 다형성 (SNP) microarray, 전체 exome 시퀀싱, 게놈 전체 메 틸 화 연구, 유전자 연구에 그들의 사용에서에서 급속 한 발전을 목격 했다 CHDs1,,89,10,11 소설 돌연변이 아직 되지 않은 유전 이체를 식별 하는 방법은 포장을 포함 하 여 복잡 한 인간의 질병의 원인 그들의 pathogenicity 적절 한 동물 모델에 대 한 테스트.
다른 질병 모델 시스템 가운데 마우스는 선택, 뿐만 아니라 초기 cardiogenesis13,14,,1516, 동안 뿐만 아니라 명료 CHDs의 메커니즘을 조사 동물 모델 임산부 및 주 스트레스 요인에 늦은 임신에서 기능과 심장 챔버 성숙에 그들의 영향. 따라서, vivo에서 phenotypic 특성 돌연변이 태아 마우스 심 혼의 개발 초기와 후반 단계를 수행 하는 것은 이러한 유전자 변이 심장 개발에 환경 요인의 역할을 이해 하는 중요 한 고 약 실 특정 성숙에 잠재적인 미래 영향 쥐에 처리합니다.
조기 발견 및 개발 하는 동안 심장 결함의 정확한 진단이 중재 계획17,18에 대 한 중요 합니다. 안전, 간단 하 고, 휴대용 하 고 반복 되 고, 태아 초음파 실제로 되고있다 이미징 병원에서 심장 평가 위한 기술 표준. 태아 순환 평가 도플러 초음파를 사용 하 여 널리 사용 되었습니다 임상 연습 심장 결함의 검출을 위한 뿐만 아니라 뿐만 아니라 혈관 이상, 태 반 부족 및 자궁내 성장 금지를 감지 하 고 평가 하 태아 복지 utero에 모욕 hypoxemia, 모성 질환 및 약물 독성17,18를 포함 하 여에 대 한 응답. 인간의 결함과 질병 평가에서 그 가치를 병렬로 태아 쥐의 초음파 평가 실험 설정19,20,,2122에서 증가 유틸리티를 얻고 있다 23. 특히, 태아 심장 초음파 (심장 초음파) 개발의 순차적 vivo에서 시각화를 수 있습니다. 많은 실험 연구 유전자 변형 태아 쥐에 태아 심장 혈관 개발 관찰을 초음파 이미징 기술을 사용. 도플러 초음파는 특히 유용 생리 적 문제 또는 질병 조건10,19태아 순환의 흐름 패턴 같은 pathophysiological 매개 변수를 명료 하 게 되었습니다. 둘 다 인간과 동물, 태아에 게 비정상적인 혈액 흐름이 나 산소 공급 utero에서 태아 환경 중단 하 고 fetoplacental 축, 태 반 이상를 포함 하 여 어머니 산소에 영향을 미칠 수 있는 다양 한 조건에서 발생할 수 있습니다. 임신 성 당뇨병, 고 약물 유도 혈관 수축15,22. 따라서 태아 쥐에 도플러 초음파를 수행 하기 위한 표준화 된 방법을 수립 강화할 것입니다 대단히 CHDs의 미래 연구 모니터링 흐름 패턴 및 동안 심혈 관 회로의 주요 hemodynamic 인덱스를 촉진 하 여 유전 마우스 모델. 에 심장 개발의 다른 단계
높은 주파수 초음파 마우스 모델 및 인간 질병18에서 심장 혈관 시스템의 개발 및 생리 적 매개 변수를 측정 하는 강력한 도구로 떠오르고 있다. 이 기술은 최근 몇 년 동안에서 더 세련 되어 있다. 우리와 다른 연구자는 태아 마우스 심 혼15,19,20,21,22에 매우 높은 주파수 초음파 연구 수행을 위한이 시스템의 타당성을 증명 하고있다 ,23. 시스템은 도플러 컬러 흐름 매핑 및 높은 주파수 (30 ~ 50 m h z) 프레임 레이트에서 2 차원, 동적 이미지를 생성 하는 선형 배열 센서를 갖추고 있습니다. 낮은 주파수 초음파 시스템 및22, 높은 주파수의 초음파21,이전 세대에 비해 이러한 이점을 제공 심층 평가 태아 순환에 대 한 필요한 감도 및 해상도 시스템, 심장 구조, 챔버 기능 및 태아 쥐의 흐름 지 수의 포괄적인 묘사를 포함 하 여 실험 설정에서. 여기, 우리가 높은 주파수 시스템을 사용 하 여 심장과 순환 및 배아 하루 E18.5에서 vivo에서 에서 feto 태 반 순환의 급속 한 평가 수행 하는 방법을 설명 합니다. 우리는 약 60 µ m의 축 분해능과 – 150 µ m의 수평 해상도 30/45 MHz 트랜스듀서를 선택 했다. 그러나, 유사한 방법론 접근에 따라 이전 발달 단계를 분석 하는 더 높은 주파수 변환기 (40/50 MHz)를 선택할 수 있습니다. M 모드는 선택 된 높은 시간 해상도 수준 (1, 000 프레임/s)에서 모션 조직의 시각화 수 있습니다. 마지막으로, 우리가 태아 심장 혈관 hemodynamic 상태 및 기능 기준선에 쥐에 있는 태아 hypoxia 스트레스에 대 한 응답에서의 상세한 포괄적인 phenotypic 특성에 대 한 높은 초음파의 타당성을 보여줍니다.

<table><tbody><tr><td>Vevo 2100</td><td>VisualSonics, 토론토, 온타리오, 캐나다</td><td>N/A</td><td>High Freequency 초음파 생체 현미경. 이 설정은 UCLA의 분자 의학과 동물 생리학 핵심 시설에서 사용할 수 있습니다. 미국</td></tr><tr><td>근친 마우스 (c57 / BL6)</td> <td>Charles River Laboratories</td><td>N / A</td><td>Inbread 야생형 마우스 균주</td></tr></tbody></table>

태아 마우스 심장 혈관 이미징 높은 주파수 초음파 (30/45 m h z) 시스템을 사용 하 여

Fetal Mouse Cardiovascular Imaging Using a High-frequency Ultrasound (30/45MHZ) System

선 천 성 심장 결함 (CHDs) 어린 시절 병 적 상태와 초기 사망률의 가장 일반적인 원인입니다. 태아 기 탐지 CHDs의 기본 분자 메커니즘의 새로운 예방 및 치료 전략을 발명에 대 한 결정적 이다. 돌연변이 마우스 모델은 새로운 메커니즘 및 심장 발달 및 그들의 잠재적인 CHDs 드라이브 환경 스트레스 한정자를 강력한 도구입니다. 그러나, 이러한 putative 참여자의 인과 관계를 설정 하는 노력 되었습니다 조직학 및 분자 비 생존 동물 실험에서 연구 하는 주요 생리 및 hemodynamic 매개 변수를 모니터링 하는 결 석. 라이브 이미징 기술을 CHDs의 병 인을 설정 하는 필수적인 도구가 되고있다. 특히, 초음파 영상 없이 사용할 수 있습니다 prenatally 수술 노출 태아, 심장 챔버의 hemodynamic 및 구조 측면에서 환경 스트레스의 영향을 모니터링 하는 동안 그들의 기준선 생리학을 유지 수 개발입니다. 여기, 높은-주파수 초음파 (30/45) 시스템 사용 하 여 심장 혈관 시스템 E18.5에서 utero에 기준선에 태아 쥐에 태아 hypoxia 노출에 대 한 응답에서을 검사 하. 우리 심장 챔버 크기, 형태, 심 실 기능, 태아 심장 박동, 그리고 탯 줄 동맥 흐름 인덱스, 그리고 조직의 만성 산소에 utero에서 진짜에서에 노출 태아 쥐에 그들의 변경 측정 시스템의 타당성 입증 시간입니다.

심장 및 hemodynamic 인덱스의 통계 분석은 오프 라인으로 수행 되었습니다. 3 최적의 이미지에서 5 연속 측정 수단을 계산 했다. 데이터는 ± SEM. 학생의 t의미 표현 했다-테스트 intergroup 비교 유추 하는 데 사용 되었다. P 값이 0.05 통계적으로 간주 되었다.
위의 프로토콜에 따라 우리 특징 태아 쥐의 심장 혈관 상태에 태아 hypoxia에 만성 노출의 영향 늦은 임신에서 실시간 고주파 초음파 녹음에 C57/BL6 초과 임신 쥐에 여 임신 일 (GD) 18.5입니다.
그룹을 번 식의 설립, 후에 성공적인 짝짓기 확인 됐다. 초과 임신 댐까지 음식과 물 광고 libitum 와 12 ...

태아 마우스의 높은 주파수 초음파 이미징 영상 해상도 개선 하 고 심장 개발 및 구조적 결함의 정확한 비-침략 적 특성을 제공할 수 있습니다. 여기에 설명 된 프로토콜은 실시간 태아 쥐 심장 초음파에서 vivo에서수행 하도록 설계 되었습니다.

태아 마우스 심장 혈관 이미징 높은 주파수 초음파 (30/45 m h Z) 시스템을 사용 하 여

Congenital heart defects (CHDs) are the most common cause of childhood morbidity and early mortality. Prenatal detection&#160;of the underlying molecular ...

다음 실험의 전반적인 목표는 고주파 초음파 시스템을 사용하여 태아 순환의 구조와 혈역학적 매개변수를 연구하는 것입니다. 이 방법은 개발 중 심장 형태 및 흐름 지수의 포괄적인 표현형을 실시간으로 제공하며, 실험 환경에서 선천성 심장 결함을 연구할 수 있습니다. 저주파 초음파 시스템과 비교했을 때, 이 기술은 고주파 프레임 레이트에서 2차원 다이나믹 이미지를 생성함으로써 더 높은 감도와 해상도를 제공합니다.시작하려면 초음파 영상 시스템과 생리학 모니터링 장치를 켭니다. 그런 다음 30-45MHz 변환기를 연결하고 해당 스캔 헤드를 이미징 플랫폼 근처의 홀더에 놓습니다. 그런 다음 심장 측정 프로그램 옵션을 선택합니다.초음파 젤을 섭씨 37도로 설정된 예열 용기에 거꾸로 놓습니다. 그런 다음 마취에 적합한 튜브 시스템을 확인하고 산소 및 이소플루란 수치를 확인합니다. 이미징 플랫폼과 작업 영역을 소독하십시오.마지막으로, 댐의 체온을 섭씨 37도의 일정한 체온으로 유지하도록 이미징 플랫폼의 열 수준을 설정합니다. 진정된 댐을 마취 유도실에서 이미징 플랫폼으로 옮기고 동물을 누운 자세로 눕힙니다. 마취 튜브 시스템에 연결된 안면 마스크를 사용하여 이소플루란으로 안정 상태 진정제를 제공합니다.전극 젤을 내장된 심전도 전극에 적용합니다. 그런 다음 산모의 심장 및 호흡수를 지속적으로 모니터링하기 위해 팔다리를 전극에 부드럽게 테이프로 붙입니다. 생리학 컨트롤러 장치에 표시되는 댐의 온도와 심박수를 모니터링합니다.이소플루란 수치를 조정하여 평균 심박수를 분당 450회에 가깝게 유지합니다. 마우스의 자세, 심박수 및 발가락 꼬집음에 대한 반응을 평가하여 적절한 마취 수준을 확인합니다. 그런 다음 제모 크림을 사용하여 가슴 중간 높이에서 하지까지 털을 제거하여 초음파 감쇠를 최소화합니다.복벽을 부드럽게 촉진하여 태아의 위치를 파악하고 퍼뜨립니다. 태아를 무리하게 퍼뜨리지 마십시오. 자궁경부를 랜드마크로 사용하여 댐의 복부에 있는 각 배아에 주석을 달고 방향을 정의합니다.방향이 신뢰할 수 없는 태아는 제외합니다. 왼쪽 자궁 뿔에 있는 태아에는 접두사 L을, 오른쪽 자궁 뿔에 있는 태아에는 R 접두사를 붙입니다. 미리 데워진 초음파 젤을 복부에 바르고 조심스럽게 펴 바릅니다., 거품 형성을 방지하기 위해.스캔 영역에 젤의 양을 추가합니다. 초음파 프로브를 기계식 홀더에 놓고 복부 쪽으로 서서히 움직여 두꺼운 젤 층과 접촉하면서 B

fetal-mouse-cardiovascular-imaging-using-high-frequency-ultrasound

Research

연구

JoVE Journal

Developmental Biology

발생생물학

이 동영상은 anesthetized 마우스 echocardiography을 수행하는 레일 마운트 고주파 초음파 프로브의 사용을 보여줍니다. 방법은 컬러 도플러, 스트레인 분석뿐만 아니라 일반 목표 대비 이미징과 같은 새로운,보다 강력한 도구 이외에도 심장 기능을 모두 종래의 2 차원 및 M 모드 측정을 설명합니다.

Murine Echocardiography 및 초음파 이미징

심장 개발에 영향을 미치는 유전자 변경을 공부할 때 태아 및 perinatal 죽음은 일반적인 기능입니다. 고주파 초음파 이미징은 2-D 해상도를 개선하고 조기 심장 개발에 우수한 정보를 제공 할 수 있으며 죽기 전에 심장 구조와 기능에 미치는 영향을 감지 할 수있는 이상적인 방법입니다.

손쥐 태아 Echocardiography

우리는 현대적인 기능 태아 심 초음파 검사와 토끼 자궁 내 태아 성장 제한의 수술 유발 모델에서 VisualSonics VEVO 2100 microultrasound를 사용하여 fetoplacental 도플러 초음파 태아 심장 기능의 검사를 설명합니다.

자궁 내 성장 제한의 토끼 모델에서 태아 심 초음파 및 펄스 파 도플러 초음파

매우 높은 주파수의 초음파는 작은 동물의 심장 이상을 검사 할 수있는 강력한 라이브 이미징 도구입니다. 그 noninvasiveness는 태아의 생리 학적 상태를 유지 할 수 있습니다. 여기서, 우리는 자궁에서 E18.5에서 태아의 심장 박동수를 측정하는 M-모드 초음파의 사용을 보여줍니다.

비 침습 M-모드 초음파 심장 검진 법에 의한 마우스의 심장 박동의 자궁 측정

여기서 우리는 생활에 초음파 미세 기포 조영제, 고립 늦은 임신 단계 쥐의 배아를 주입하는 프로토콜을 제시한다. 이 방법은 관류의 매개 변수 및 조영 증강 고주파 초음파 영상을 이용한 혈관 내 배아 분자 마커의 연구를 가능하게한다.

고주파 초음파를 사용하여 마우스 태아에 대비 이미징

마우스 널리 임신 생물학을 공부 하는 데 사용 됩니다. 그러나, 임신 종료는 이러한 연구는 경도 조사 하는 걸로 하 고 동물의 큰 숫자의 사용을 필요로 필요 합니다. 따라서 조기 발견에 대 한 높은 주파수 초음파의 비-침략 적 기법 및 임신 마우스에서 후 이식 이벤트 모니터링 설명 합니다.

마우스에서 초기 임신 특성에 대 한 3 차원 높은-주파수 초음파의 새로운 사용

여기는 vivo에서 쥐에 있는 태아의 분석에 대 한 높은 주파수 초음파의 기법에 설명합니다. 이 메서드는 태아의 속 행 및 placental 매개 변수 뿐만 아니라 임신에 걸쳐 임산부 및 태아 혈액 흐름의 분석을 수 있습니다.

비보에 태아 및 태 반 개발의 분석에 대 한 높은 주파수 초음파

고해상도 초음파는 임신 상태, 임신 연령 및 임신 손실을 결정하여 임신 시간 임신 마우스를 요구하는 실험을 간소화하는 데 도움이 될 수 있습니다. 여기에 제시된 것은 임신을 모방할 수 있는 잠재적인 함정 (이미지 아티팩트)뿐만 아니라 마우스 임신을 평가하는 방법을 설명하는 프로토콜입니다.

내 마우스가 임신? 고주파 초음파 평가

본 프로토콜은 7일령 신생아 마우스에서 좌심실 형태, 기능, 및 관상동맥 혈류의 심초음파학적 평가를 기술한다.

신생아 마우스의 좌심실 구조, 기능 및 관상 동맥 흐름의 심 초음파 특성

높은 공간 해상도(100μm)와 감도를 가진 초고속 도플러 초음파(UFUS)는 간 혈관 구조에 대한 포괄적인 정성적 개요를 얻기 위한 적절한 비침습적 이미징 방식을 나타냅니다. UFUS는 또한 미세혈관 구조의 정량적 측정을 용이하게 하여 혈관 질환 메커니즘에 대한 이해를 높이는 것을 목표로 합니다.

초고속 도플러 초음파를 이용한 생쥐의 간 혈관 구조의 이미징 및 정량화

배우세요 고주파 초음파를 이용한 태아 마우스 심장 혈관 이미징 방법을 통해 선천성 심장 결함을 비침습적으로 실시간 모니터링하고 심장 형태와 혈류 지수를 정밀 분석하는 기술을 익히세요.

태아 마우스 심장 혈관 이미징 높은 주파수 초음파 (30/45 m h Z) 시스템을 사용 하 여

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