Name: ייצור של ברוילרים ללא חיידקים הגדלים במהירות מקו מסחרי ללימודי מיקרוביוטה (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2020-06-18T13:30:00.000+00:00
Duration: 5 min 51 s
Description: למדו שיטה לייצור אפרוחים נטולי חיידקים מביצי תרנגולות ברוילר מסחריות מקו Ross PM3. הטכניקה מאפשרת מחקרי מיקרוביוטה ברקע גנטי של עופות חווה.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

המחברים מודים למגדלים ולחברה Boyé accouvage (La Boissière en Gâtine, צרפת) על אספקת ביציות מופרות. מחקר זה נערך בחסות קונסורציום המחקר APR-IA "INTEGRITY" (2017-2019), אשר מומן על ידי מרכז רג'יון ואל דה לואר, צרפת.

נהלי הטיפול בבעלי חיים בוצעו בהתאם להנחיות שנקבעו על ידי הדירקטיבה של מועצת הקהילות האירופית (86/609/EEC) ועל ידי התקנות הצרפתיות בנושא ניסויים בבעלי חיים.
1. הכנת מבודד
<ol><li>הכנס את החומרים הדרושים לתוך מבודד קשיח בלחץ חיובי: צינורות 50 מ"ל, 5, 10 ו 25 מ"ל פיפטות פלסטיק, מזון מוקרן, מים אוטוקלאבים ומכלי פלסטיק אטומים סטריליים.</li>
	<li>מלאו את מלכודת ההעברה עם תמיסת אמוניום רבעונית של 2%.</li>
	<li>לעקר את המבודד שלוש פעמים עם אדי פורמלדהיד באמצעות 60 מ"ל של פורמלין (24% פורמלדהיד) בתוספת 30 גרם אשלגן פרמנגנט למטר מעוקב (m3). הזז את החומרים בתוך המבודד בין כל עיקור כדי להבטיח עיקור של כל משטחי המגע.</li>
	<li>הגדר את טמפרטורת המבודד ל -37 מעלות צלזיוס למשך יומיים לפחות לפני החדרת הביצים. הגדר את מד המזמורים ל-65-70% מהלחות היחסית (RH) ביום ההקדמה.</li>
</ol>2. איסוף ביצים ודגירה
<ol><li>אספו את הביצים מחוות שנבחרו על בסיס קצב בקיעתן הטוב של התרנגולות המטילות (לפחות 80% בשיא ייצור הביצים) ומצבן הסניטרי הטוב (כלומר, היעדר פתוגנים נפוצים של עופות והיעדר מחלות בתוך הצאן). בחר באופן חזותי ביצים נקיות וללא רבב על ההליכון.</li>
	<li>נטרלו מיד את פני הביצה על ידי טבילתם למשך 5 דקות בתמיסת חומצה פראצטית של 1.5% בטמפרטורת החדר.</li>
	<li>מעבירים את הביצים למתקן הניסוי באמצעות קופסה עם אדי פורמלדהיד.</li>
	<li>אחסנו את הביצים למשך 24 שעות בטמפרטורה של 4 מעלות צלזיוס. חזרו על תהליך הפירוק המתואר בשלב 2.2, והניחו אותם בחממת בקיעה (יום 0) למשך 19 יום.</li>
</ol>3. בקיעה
<ol><li>ביום ה-19, אמתו את הפוריות, את הכדאיות (תנועתיות) ואת התפתחות העובר על ידי תפירתם באמצעות נר ביצית קל בתנאים סטריליים. הכניסו רק ביצים שעברו עובר חי לתוך מבודדי הבקיעה הסטרילית.</li>
	<li>נטרלו את הביצים שנבחרו על ידי ריסוס תמיסת חומצה פראצטית של 1.5% במשך 30 שניות או עד שכל פני השטח של כל ביצה מכוסים. ביצים ישמרו על קשר עם התרסיס במשך 16 דקות ו -30 שניות במהלך ההעברה למבודדים.</li>
	<li>מעבירים את הביצים למבודדים הבוקעים הסטריליים ושוטפים אותן במים סטריליים שעברו דה-מינרליזציה לפני שמניחים אותן בחלל הבקיעה. הערה: בעלי חיים בוקעים ומגודלים מבודדים סטריליים. הם מוזנים ב-ad libitum בתזונה מסחרית המעוקרת על ידי הקרנת גמא ומושקים במי ברז אוטוקלביים המסופקים על ידי מתקני מים.</li>
</ol>4. ניתוח מצב בקטריולוגי
<ol><li>יום אחד לאחר הבקיעה, קחו דגימת צואה ישירות מפי הטבעת של אפרוחים שונים ואספו אותם בצינור זכוכית מעוקר כדי להפוך דגימה זו למייצגת את כל בעלי החיים בתוך מבודד נתון.</li>
	<li>דגימות הצואה הן פחות או יותר נוזליות, מוסיפות שווה ערך של 1 מ"ל של צואה ל -9 מ"ל של ציר thioglycolate עם resazurin. מוסיפים את דגימת הצואה הנותרת ל-9 מ"ל של ציר עירוי לב במוח (BHI) ומדגרים את הצינורות בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס מבלי לרעוד במשך 18 עד 48 שעות. זה יאפשר צמיחה של מגוון רחב של מינים אירוביים אירוביים, אירוביים פקולטטיביים ואנאירוביים שאינם עמידים. הערה: ציר Thioglycolate עם resazurin מיועד לזיהוי של חיידקים אנאירוביים שאינם עמידים, אך הוא גם מאפשר זיהוי של חיידקים אירוביים. מדיום זה תואם את הפרמקופיאה האירופית, האמריקאית והיפנית לבדיקת סטריליות 18,19,20.</li>
	<li>חזותית לראות אם כל שינוי במדיית הצמיחה מתרחשת לאחר 18 שעות של דגירה. לאחר 48 שעות, קחו טיפה ממדיית ציר הצואה של BHI, הניחו אותה על מגלשת זכוכית והתבוננו מתחת למיקרוסקופ (הגדלה של פי 40) להיעדר או נוכחות של חיידקים.</li>
	<li>אם יש חשד לגבי נוכחותם של חיידקים, קחו דגימה מתרבית BHI וזרעו אותה על צלחות אגר BHI. דגירה בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס למשך 18 עד 48 שעות.</li>
	<li>אם קיימות מושבות, בצע טכניקות בתפוקה גבוהה כגון ספקטרומטריית מסות MALDI-TOF לזיהוי מיקרוביאלי מדויק. הערה: לאחר 72 שעות, אם הניתוחים הבקטריולוגיים שליליים, בעלי החיים מוכרזים כנקיים מחיידקים.</li>
</ol>

<ol><li>Shang, Y., Kumar, S., Oakley, B., Kim, W. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chicken+microbiota%3A+importance+and+detection+echnology%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Veterinary+Science%22%5BJournal%5D)">Chicken microbiota: importance and detection echnology.</a> Frontiers in Veterinary Science. 23, 5(2018).</li>
<li>Grover, M., Kashyap, P. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Germ-free+mice+as+a+model+to+study+effect+of+gut+microbiota+on+host+physiology%5BTitle%5D)+AND+%22Neurogastroenterology+%26+Motility%22%5BJournal%5D)">Germ-free mice as a model to study effect of gut microbiota on host physiology.</a> Neurogastroenterology & Motility. 26 (6), 745-748 (2014).</li>
<li>Umesaki, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Use+of+gnotobiotic+mice+to+identify+and+characterize+key+microbes+responsible+for+the+development+of+the+intestinal+immune+system%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+Japan+Academy%2C+Ser.+B%2C+Physical+and+Biological+Sciences%22%5BJournal%5D)">Use of gnotobiotic mice to identify and characterize key microbes responsible for the development of the intestinal immune system.</a> Proceedings of the Japan Academy, Ser. B, Physical and Biological Sciences. 90 (9), 313-332 (2014).</li>
<li>Carrasco, J. M., Casanova, N. A., Fernández, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microbiota%2C+gut+health+and+chicken+productivity%3A+what+is+the+connection%3F%5BTitle%5D)+AND+%22Miyakawa.+Microorganisms%22%5BJournal%5D)">Microbiota, gut health and chicken productivity: what is the connection?</a> Miyakawa. Microorganisms. 7 (10), 374(2019).</li>
<li>Lee, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+microbial+communities+in+the+chicken+oviduct+and+the+origin+of+chicken+embryo+gut+microbiota%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Characterization of microbial communities in the chicken oviduct and the origin of chicken embryo gut microbiota.</a> International Journal of Scientific Reports. 9 (1), 6838(2019).</li>
<li>Hincke, M. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dynamics+of+structural+barriers+and+innate+immune+components+during+incubation+of+the+avian+egg%3A+critical+interplay+between+autonomous+embryonic+development+and+maternal+anticipation%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Innate+Immunity%22%5BJournal%5D)">Dynamics of structural barriers and innate immune components during incubation of the avian egg: critical interplay between autonomous embryonic development and maternal anticipation.</a> Journal of Innate Immunity. 11 (2), 111-124 (2019).</li>
<li>Le Bars, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Demonstration+of+a+protocol+for+obtaining+germ-free+chickens%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+of+Veterinary+Research%22%5BJournal%5D)">Demonstration of a protocol for obtaining germ-free chickens.</a> Annals of Veterinary Research. 7, 383-396 (1976).</li>
<li>Lafont, J. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental+study+of+some+factors+limiting+%27competitive+exclusion%27+of+Salmonella+in+chickens%5BTitle%5D)+AND+%22Research+in+Veterinary+Science%22%5BJournal%5D)">Experimental study of some factors limiting 'competitive exclusion' of Salmonella in chickens.</a> Research in Veterinary Science. 34 (1), 16-20 (1983).</li>
<li>Brée, A., Dho, M., Lafont, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparative+infectivity+for+axenic+and+specific-pathogen-free+chickens+of+O2+Escherichia+coli+strains+with+or+without+virulence+factors%5BTitle%5D)+AND+%22Avian+Diseases%22%5BJournal%5D)">Comparative infectivity for axenic and specific-pathogen-free chickens of O2 Escherichia coli strains with or without virulence factors.</a> Avian Diseases. 33 (1), 134-139 (1989).</li>
<li>Dozois, C. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bacterial+colonization+and+in+vivo+expression+of+F1+%28type+1%29+fimbrial+antigens+in+chickens+experimentally+infected+with+pathogenic+Escherichia+coli%5BTitle%5D)+AND+%22Avian+Diseases%22%5BJournal%5D)">Bacterial colonization and in vivo expression of F1 (type 1) fimbrial antigens in chickens experimentally infected with pathogenic Escherichia coli.</a> Avian Diseases. 38 (2), 231-239 (1994).</li>
<li>Schouler, C., Taki, A., Chouikha, I., Moulin-Schouleur, M., Gilot, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+genomic+island+of+an+extraintestinal+pathogenic+Escherichia+coli+strain+enables+the+metabolism+of+fructooligosaccharides%2C+which+improves+intestinal+colonization%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Bacteriology%22%5BJournal%5D)">A genomic island of an extraintestinal pathogenic Escherichia coli strain enables the metabolism of fructooligosaccharides, which improves intestinal colonization.</a> Journal of Bacteriology. 191 (1), 388-393 (2009).</li>
<li>Porcheron, G., Chanteloup, N., Trotereau, A., Brée, A., Schouler, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+fructooligosaccharide+metabolism+on+chicken+colonization+by+an+extra-intestinal+pathogenic+Escherichia+coli+strain%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Effect of fructooligosaccharide metabolism on chicken colonization by an extra-intestinal pathogenic Escherichia coli strain.</a> PLoS One. 7 (4), 35475(2012).</li>
<li>Kraimi, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+a+gut+microbiota+transfer+on+emotional+reactivity+in+Japanese+quails+%28Coturnix+japonica%29%5BTitle%5D)+AND+%22of+Experimental+Biology%22%5BJournal%5D)">Effects of a gut microbiota transfer on emotional reactivity in Japanese quails (Coturnix japonica).</a> of Experimental Biology. 222, (2019).</li>
<li>Stanley, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intestinal+microbiota+associated+with+differential+feed+conversion+efficiency+in+chickens%5BTitle%5D)+AND+%22Applied+microbiology+and+biotechnology%22%5BJournal%5D)">Intestinal microbiota associated with differential feed conversion efficiency in chickens.</a> Applied microbiology and biotechnology. 96, 1361-1369 (2012).</li>
<li>Han, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Influence+of+the+gut+microbiota+composition+on+Campylobacter+jejuni+colonization+in+chickens%5BTitle%5D)+AND+%22Infection+and+Immunity%22%5BJournal%5D)">Influence of the gut microbiota composition on Campylobacter jejuni colonization in chickens.</a> Infection and Immunity. 85 (11), 0038017(2017).</li>
<li>Thomas, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gut+microbial+dynamics+during+conventionalization+of+germ-free+chicken%5BTitle%5D)+AND+%22mSphere%22%5BJournal%5D)">Gut microbial dynamics during conventionalization of germ-free chicken.</a> mSphere. 4 (2), 00035-00119 (2019).</li>
<li>Langhout, D. J., Schutte, J. B., de Jong, J., Sloetjes, H., Verstegen, M. W., Tamminga, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+viscosity+on+digestion+of+nutrients+in+conventional+and+germ-free+chicks%5BTitle%5D)+AND+%22British+Journal+of+Nutrition%22%5BJournal%5D)">Effect of viscosity on digestion of nutrients in conventional and germ-free chicks.</a> British Journal of Nutrition. 83 (5), 533-540 (2000).</li>
<li>European Pharmacopoeia. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22European+Pharmacopoeia+%28Ph.+Eur.%29%3A+Supplement+6.3%2C+Sterility%22">European Pharmacopoeia (Ph. Eur.): Supplement 6.3, Sterility</a>. , reference 01/2009:20601 (2009).</li>
<li>Japanese Pharmacopoeia, Japanese Pharmacopoeia. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aJapanese+Pharmacopoeia%2C++%22Japanese+Pharmacopoeia+%28JP%29%3A+The+4.06+Sterility+Test+as+it+appeared+in+the+partial+revision+of+the+JP+15th+edition%22">Japanese Pharmacopoeia (JP): The 4.06 Sterility Test as it appeared in the partial revision of the JP 15th edition</a>. , made official March 31, 2009, by the Ministry of Health, Labour and Welfare Ministerial Notification No. 190 (2009).</li>
<li>United States Pharmacopeia (USP). <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22United+States+Pharmacopeia+%28USP%29%3A+Sterility+Tests+as+presented+in+Pharmacopeial+Forum%2C+Interim+Revision+Announcement+No.+6%22">United States Pharmacopeia (USP): Sterility Tests as presented in Pharmacopeial Forum, Interim Revision Announcement No. 6</a>. 34 (6), December 1, 2008, official on May 1, 2009 (2008).</li>
<li>Harrison, G. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Production+of+germ-free+chicks%3A+a+comparison+of+the+hatchability+of+eggs+sterilized+externally+by+different+methods%5BTitle%5D)+AND+%22Laboratory+Animals%22%5BJournal%5D)">Production of germ-free chicks: a comparison of the hatchability of eggs sterilized externally by different methods.</a> Laboratory Animals. 3 (1), 51-59 (1969).</li>
<li>Yokota, H., Furuse, M., Okumura, J., Iwao Task, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+simple+method+for+production+and+rearing+of+the+germ-free+chick%5BTitle%5D)+AND+%22J-STAGE+home+Nihon+Chikusan+Gakkaiho%22%5BJournal%5D)">A simple method for production and rearing of the germ-free chick.</a> J-STAGE home Nihon Chikusan Gakkaiho. 55 (8), (1984).</li>
<li>Ding, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inheritance+and+establishment+of+gut+microbiota+in+chickens%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Microbiology%22%5BJournal%5D)">Inheritance and establishment of gut microbiota in chickens.</a> Frontiers in Microbiology. 8, 1967(2017).</li>
</ol>

למחברים אין מה לחשוף.

מספר שיטות ליצירת תרנגולות ללא חיידקים תוארו בעבר 7,21,22. שיטות פשוטות, כמו זו המוצגת כאן, משתמשות בחומרי חיטוי שונים כדי להפחית את עומס החיידקים בפני השטח של הביצה ובמבודדים. חומרי החיטוי הנפוצים ביותר הם כספית כלוריד, אמוניום רבעוני, יודופורם, נתרן היפוכלוריט ותמיסות כלור דו חמצני. התוצאות הן לעתים קרובות משביעות רצון. עם זאת, למרות הנגישות של שיטות אלה, מעטים המבנים שיכולים ליישם את השיטה ולגדל את בעלי החיים בקנה מידה גדול, ובכך להפוך את השימוש בתרנגולות ללא חיידקים לגישה נדירה יחסית, המשמשת רק כדי לענות על שאלות מדעיות ספציפיות מאוד. השיטות, החומרים והציוד המתוארים כאן מאפשרים שיעור בקיעה יעיל ביותר של יצורים ללא נבטים, שנשארים בריאים וסטריליים למשך 3 שבועות לפחות (משך הניסויים המדעיים שאליהם הם יוצרו).
התוצאות מראות כי התאמת הפרוטוקול לייצור אפרוחים ללא חיידקים מביצים שנאספו בחוות עופות מסחריות היא מוצלחת. הניסיון בייצור ביצי SPF מגלה כי יעילות הבקיעה תלויה בעיקר בגיל התרנגולות המטילות ובאיכות הביצים שנאספו. שני הפרמטרים נלקחו בחשבון כאשר נבחרו חוות וביצים נאספו. באותה שיטה, שיעור הבקיעה הממוצע של תרנגולות ללא נבטים הוא הרבה יותר טוב מזה שהושג בייצור האחרון של תרנגולות מינון SPF במתקן שלנו (79% לעומת 35%), מבלי להשפיע על עקרות בעלי החיים (87% לעומת 83%). הבדלים אלה עשויים להיות קשורים לרקע הגנטי של הציפורים (broilers לעומת שכבות) כמו גם לאיכות קליפת הביצה, אשר סביר להניח להיות שברירית יותר בביצים של בעלי החיים SPF, המוחזקים ברבייה סגורה במשך יותר מ -40 שנה. יתר על כן, אנו גם מראים כי הובלה של יותר מ 2 שעות (מן החוות למתקן הניסוי) אינו משפיע על יעילות הבקיעה ואיכות.
אף על פי שתהליך העיקור המשמש לבקיעת מבודדים והפרוטוקול לפירוק ביצים עברו אופטימיזציה, כ-10% מהמבודדים לא היו נקיים מחיידקים. על מנת להבין את מקור הזיהום, חשוב מאוד לבצע בקרת סטריליות שגרתית של מבודדי הבקיעה לפני הכנסת הביצים.
בנוגע למצב הסטריליות של הציפורים, ניסינו ליישם שיטות המאפשרות צמיחה של חיידקים אנאירוביים אירוביים ולא עמידים מדגימות צואה, ובכך להבטיח שאנו מזהים חיידקים חיים בני קיימא. שיטות אלה תואמות את הפרמקופיות הבינלאומיות לבדיקות סטריליות ומייצגות טכניקות מהירות, קלות ומופחתות עלויות לשימוש שגרתי. עם זאת, ניתן ליישם טכניקות ביולוגיה מולקולרית כגון ריצוף גנים של 16S rRNA, אם כי לא נותנות מידע על כדאיות החיידקים, לאישור נוכחותם של חיידקים שאינם ניתנים לעיבוד. ואכן, מחקר שנערך לאחרונה העלה את ההשערה כי חלק מהחיידקים של המיקרוביוטה האימהית אובידוקט מועברים לעובר דרך חלבון הביצית, ובהמשך מהווים את רוב אוכלוסיית חיידקי המעיים העוברית5. יתר על כן, מחקר אחר העלה את ההשערה כי חלק מהמתיישבים המיקרוביאליים שהוכנסו לעוברים מוקדמים עברו בתורשה מתרנגולות אימהיות, והשפע והמגוון המיקרוביאליים של המעיים הושפעו מאוחר יותר מגורמים סביבתיים ומגנטיקה של המארחים במהלך התפתחות23. עם זאת, תוצאות המחקרים האלה מבוססות על ניתוח רצף דנ"א, שבו מספר גדול של חיידקים אלה יכולים להיות מתים או לא ניתנים לשכפול בחלבון הביצה (עמוס מאוד במולקולות אנטי-מיקרוביאליות). תומס ושותפיו16 ביצעו בדיקות סטריליות באמצעות הערכה של חיידקים אירוביים אירוביים וסיפקטיביים הניתנים לעיבוד באמצעות הטלת צואה על צלחות BHI, ובכך הדגישו את היעילות של שיטות בקטריולוגיות סטנדרטיות לבקרת סטריליות ללא חיידקים. יתר על כן, בפרוטוקול המוצע, השתמשנו בניטור גדילה בציר תיוגליקולאט עם רזאורין כדי להיות מסוגלים לזהות את הצמיחה של חיידקים אנאירוביים שאינם עמידים.
הפרוטוקול, שכבר שימש לייצור שליו ותרנגולות ללא נבטים, ניתן להתאמה לייצור בעלי חיים נטולי חיידקים מרוב הציפורים המקננות ומציע נקודות מבט לחקר תרומת המיקרוביוטה לפיזיולוגיה של בעלי חיים אלה. מלבד השימוש במודל זה כדי לחקור את האינטראקציות ההדדיות בין פונדקאי למיקרוביוטה במעי העופות, הוא עשוי להיות שימושי גם למחקר יישומי. לדוגמה, ניתן להשתמש בו כדי להעריך את הבטיחות והיעילות של פרוביוטיקה שמקורה במיקרואורגניזמים של המעיים כדי לשפר את בריאותם ועמידותם של בעלי החיים.

חלה עלייה דרמטית בהתעניינות המדעית והפופולרית בנוגע לתרומתה של המיקרוביוטה של המעיים לבריאות בעלי החיים. המיקרוביוטה, המורכבת מחיידקים, וירוסים, פטריות וארכיאה המאכלסים נישות שונות במעי החיה, מעורבת במישרין או בעקיפין בוויסות של מחלות דלקתיות, זיהומיות ומטבוליות המשפיעות לא רק על מיני יונקים אלא גם על בעלי חיים, כגון עופות1. מספר מודלים של בעלי חיים פותחו כדי לחקור טוב יותר את התרומה של המיקרוביוטה של המעיים לבריאות ולמחלות. לדוגמה, בעלי חיים נטולי חיידקים וגנוטוביוטים מאפשרים לחקור את היעדרם המוחלט של מיקרובים או של מיקרוביוטה ידועה, בהתאמה, על הפיזיופתולוגיה של זיהומים 2,3. עם זאת, יצירה ותחזוקה של בעלי חיים אלה דורשת טכניקות ומתקנים מיוחדים, והעלויות, העבודה והכישורים הנדרשים כדי לתחזק אותם מגבילים את גישתם לחוקרים רבים. ואכן, בעלי חיים ללא חיידקים חייבים להיות מנוטרים באופן קבוע לאיתור זיהום אפשרי באמצעות שילוב של שיטות גידול חיידקים, מיקרוסקופיה, סרולוגיה, מורפולוגיה גסה וטכניקות זיהוי מבוססות ריצוף. נהלים דומים חלים גם על מינים אחרים, כגון בעלי חיים, שבהם בעלי החיים בדרך כלל גדולים יותר ודורשים מתקנים גדולים יותר לצורך הרבייה והתחזוקה שלהם, מה שעלול לעכב, במידה מסוימת, את המחקר על המיקרוביוטה.
עופות, ליתר דיוק תרנגולות, הם אבן הפינה של ייצור בעלי חיים ברחבי העולם, עם אוכלוסיית להקות שעשויה לעלות על 40 מיליארד ציפורים בשנה. זהו המקור החשוב ביותר של חלבון מן החי בעולם (http://www.fao.org/poultry-production-products/en/). יתר על כן, אין טאבו תרבותי או דתי הקשור לגידול או לצריכה של תרנגולות. המיקרוביוטה של המעיים בעופות מעורבת באופן חשוב בגדילה של בעלי חיים, יחס המרת מזון, חסינות, עמידות בפני פתוגנים, בין תהליכים תזונתיים, פיזיולוגיים או פתולוגיים רבים אחרים4. הדור של תרנגולות ללא חיידקים הוא אפוא הכרחי כדי להדגיש את הדיאלוג בין המיקרוביוטה לבין המארחשלה 4. גם אם קהילות מיקרוביאליות מאכלסות את עוףoviduct 5, התוכן של ביצה שהוטלה זה עתה על ידי תרנגולת בריאה נקי ברובו ממיקרואורגניזמים, קליפת הביצה והממברנות בעלות מחסומים מכניים כדי למנוע פלישת מיקרואורגניזמים4. בנוסף, אפרוחים גדלים בקלות בהיעדר קרוביהם, אשר, בניגוד ליונקים, מאפשר ייצור של בעלי חיים ללא חיידקים ללא גידול הורי בתנאים סטריליים.
מתקן הניסוי "זיהום של חיות חווה, מודל וחיות בר" (PFIE, UE-1277, מרכז INRAE Val de Loire, Nouzilly, צרפת, https://doi.org/10.15454/1.5572352821559333e12) הוא חלק מרשת התשתיות הלאומית הצרפתית EMERG'IN (https://www.emergin.fr/). PFIE שולטת בייצור תרנגולות ללא חיידקים כדי לבצע מחקרים ניסיוניים שונים במשך יותר מ -40 שנה 7,8,9,10,11. בעלי חיים אלה הופקו מביצים ספציפיות ללא פתוגנים (SPF) מקו הטלת קרן רגל לבן שגדל ברבייה סגורה מאז שנות ה-70 של המאה ה-20. ציפורים ללא חיידקים, המשמשות בעיקר למחקרים מיקרוביולוגיים 7,8,9, חוות התעוררות מחודשת של עניין עם שאלות כמו תרומת המיקרוביוטה של המעיים להתנהגות13, ניצול מזין14, התפתחות מערכת החיסון15 ופעילות אנדוקרינית. גם אם חלק מהמחקרים פורסמו באמצעות קווי ברוילר16 נטולי חיידקים, מחקרים אלה עדיין אינם מיוצגים כראוי בהשוואה למחקרים המשתמשים בקווי שכבות ניסיוניים. האבולוציה של השאלות המדעיות לקראת ההצלבה בין המיקרוביוטה לבין המארח שלה בבריאות ורווחת העופות הובילה אותנו להתאים את הפרוטוקול ההיסטורי שלנו כדי לייצר ברוילרים נטולי חיידקים של קו Ross PM3, קו העוף הברוילר הנפוץ ביותר בעולם.

<table><tbody><tr><td>2 מ"ל פיפטות פלסטיק סטריליות</td><td>Starsted</td><td>86.1252.001</td><td></td></tr><tr><td>צינורות 50 מ"ל</td><td>פלקון</td><td></td><td></td></tr><tr><td>BHI אגר צלחות תרמו</td><td>פישר אבחון</td><td>PO1198A</td><td></td></tr><tr><td>מרק עירוי לב</td><td>תרמו פישר אבחון</td><td>CM1135</td><td></td></tr><tr><td>צינורות זכוכית עם 9 מ"ל מרק</td><td></td><td></td> BHI <td>תוצרת בית ומעוקר על ידי חיטוי</td></tr><tr><td>צינורות זכוכית עם מרק תיוגליקולט 9 מ"ל עם רזזורין</td><td></td><td></td><td>תוצרת בית ומעוקר על ידי חיטוי</td></tr><tr><td>חממת בקיעה</td><td>Fieme</td><td>MG 576</td><td></td></tr><tr><td>אינקובטור</td><td>Memmert</td><td></td><td>לתרבית בקטריולוגית, 37 מעלות; C</td></tr><tr><td>הזנה מוקרנת</td><td>בטוחה</td><td>U8983G10R</td><td>40 kG מבודדים</td></tr><tr><td></td><td></td><td></td> מוקרנים <td>תוצרת בית. 1 m3 מבודד קשיח בלחץ חיובי</td></tr><tr><td>ארון בטיחות מיקרוביולוגי</td><td>Thermon Electron Corporation</td><td></td><td>דגם: Hera</td></tr><tr><td>Safe Microscope Visiscope series 300</td><td>VWR</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Pipette aid</td><td>Drummond</td><td></td><td></td></tr><tr><td>פיפטות</td><td></td><td></td><td></td>פלסטיק</tr><tr><td>קופסאות אטומות סטריליות</td><td>קוטר</td><td>Tuperware</td><td></td></tr><tr>צינור <td></td><td></td><td>זכוכית מעוקר</td> <td>"sovirel"</td></tr> <tr><td>מרק תיוגליקולט עם Resazurin</td><td>Merck</td><td>90404-500G</td><td></td></tr><tr><td>אמבט מים</td><td>פישר מדעי</td><td></td><td>דגם: פוליסטט 36, משמש לדגירה של 10 דקות ב-100 מעלות; C את צינורות הזכוכית עם מרק תיוגליקולט 9 מ"ל עם רזזורין על מנת לחדש את המדיום</td></tr></tbody></table>

ייצור של ברוילרים ללא חיידקים הגדלים במהירות מקו מסחרי ללימודי מיקרוביוטה

Production of Germ-Free Fast-Growing Broilers from a Commercial Line for Microbiota Studies

מחקרים על תרומת המיקרוביוטה של המעיים לפיזיולוגיה של המארח ולתכשירות חיסונית מתאפשרים הודות לזמינותם של מודלים של בעלי חיים נטולי חיידקים, הנחשבים לתקן הזהב. ציפורי קינון הן מודלים אידיאליים לייצור בעלי חיים ללא חיידקים, שכן אין צורך לגדל את קרוביהם בתנאים סטריליים. תרנגולות ללא חיידקים מופקות בעיקר מקווי ניסוי ספציפיים-נטולי פתוגנים (SPF), המייצגים בצורה גרועה קווי עוף מסחריים. השיטה שהוצעה כאן אפשרה ייצור של תרנגולות ללא חיידקים מקו הברוילרים הגדל במהירות רוס PM3, המשמש בדרך כלל את תעשיית העופות. הביצים נאספו במהירות לאחר הטלתן בחוות מגדלי תותחים. הם עברו תהליך טיהור קפדני מהאוסף ועד להקדמה בבידוד בקיעת ביצים סטרילי. האפרוחים בקעו ונשמרו במבודדים סטריליים אלה בתקופה הדרושה כדי לשלוט בעקרותם. הפרוטוקול הנוכחי, שפותח במקור עבור קו קרניים לבנים ניסיוני עם SPF, הותאם לא רק לקו ה-Ross PM3 broiler אלא גם לשליו. לפיכך הוא מייצג הליך חזק וניתן להתאמה בקלות למיני עופות אחרים ולציפורים מקננות בעלות רלוונטיות כלכלית, ביולוגית או אקולוגית.

שש ריצות של דור אפרוחים נטולי חיידקים נערכו עם ביצי רוס PM3 שהגיעו משתי חוות צרפתיות שונות (טבלה 1). בסך הכל נאספו 853 ביצים ולאחר שני שלבים של פירוק ו-19 ימי דגירה, 86.40% היו בני קיימא. 490 מהביצים הקיימות הללו עברו שלב פירוק שלישי והוכנסו לבידודים שונים של הבקיעה, לשיעור בקיעה ממוצע של 79.80%. נתון זה מייצג שיעור בקיעה של 68.94% בהשוואה למספר הביצים ההתחלתי שנאסף.
עם זאת, תוצאות הבקיעה משתנות באופן משמעותי בהתאם לסדרה שבוצעה: מ-41.67% ל-88.16% מהאפרוחים בני הקיימא בהשוואה למספר הביצים שנאספו. וריאציות אלה נצפו גם בין הפתחים השונים במהלך אותו ניסוי. מכיוון שלא כל המבודדים שימשו לכל הריצות, קשה להחריג השפעה התלויה במבודד. עם זאת, אפקט אצווה זה היה בקורלציה ישירה עם גילן של התרנגולות המטילות (איור 1), שם ביצים שהגיעו מתרנגולות מבוגרות יותר היו פחות בנות קיימא.
שש הריצות בוצעו באמצעות ארבעה מבודדי בקיעה שונים. לאחר בקרה בקטריולוגית, אושר כי בעלי החיים מ-14 מתוך 16 המבודדים היו נקיים מחיידקים. זה מתאים לשיעור הצלחה של 87.5%. שני המבודדים הנותרים היו מזוהמים על ידי חיידק סביבתי אחד ולא פתוגני.
כל בעלי החיים ששימשו לניסויים המדעיים נותרו נקיים מחיידקים עד סוף המחקרים, במשך שלושה שבועות לפחות לאחר הבקיעה.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/61148/61148fig1v2.jpg"> איור 1: השפעת גיל התרנגולת על קצב הבקיעה הנתון הנוכחי מדגיש את שיעורי הבקיעה שנצפו על סמך גילו של עדר התרנגולות המטיל, שבא לידי ביטוי בשבועות של שכבה. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/61148/61148fig1v2large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של נתון זה.</a>
<table border="1" fo:font-size="5px" fo:keep-together.within-page="1"><tbody>
<tr>
<td></td>
			<td>ביצים שנאספו</td>
			<td>D19 ביצים בנות קיימא</td>
			<td>D19 ביצים בנות קיימא/ביצים שנאספו</td>
			<td>ביצים שהוכנסו למבודד 1</td>
			<td>ביצים שהועתקו למבודד 2</td>
			<td>ביצים שהוכנסו למבודד 3</td>
			<td>ביצים שהועתקו למבודד 4</td>
			<td>סה"כ הביצים המועברות</td>
			<td>אפרוחים בני קיימא בקעו לתוך מבודד 1</td>
			<td>אפרוחים בני קיימא בקעו לתוך מבודד 2</td>
			<td>אפרוחים בני קיימא בקעו לתוך מבודד 3</td>
			<td>אפרוחים בני קיימא בקעו למבודד 4</td>
			<td>סה"כ אפרוחים בוקעים בני קיימא</td>
			<td>מבודד ביצים בוקעות/מועברות בר קיימא1</td>
			<td>מבודד ביצים בוקעות/מועברות בר קיימא2</td>
			<td>מבודד ביצים בוקעות/מועברות בר קיימא3</td>
			<td>מבודד ביצים בוקעות/מועברות בר קיימא4</td>
			<td c="">ביצים ברות קיימא שבקעו/הועברו ברחבי העולם</td>
		</tr>
<tr>
<td>ריצה 1</td>
			<td>101</td>
			<td>93</td>
			<td>92.08%</td>
			<td>23</td>
			<td>24</td>
			<td>-</td>
			<td>-</td>
			<td>47</td>
			<td>22</td>
			<td>23</td>
			<td>-</td>
			<td>-</td>
			<td>45</td>
			<td>95.65%</td>
			<td>95.83%</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>95.74%</td>
		</tr>
<tr>
<td>ריצה 2</td>
			<td>130</td>
			<td>117</td>
			<td>90.00%</td>
			<td>25</td>
			<td>25</td>
			<td>25</td>
			<td></td>
			<td>75</td>
			<td>20</td>
			<td>24</td>
			<td>18</td>
			<td>-</td>
			<td>62</td>
			<td>80.00%</td>
			<td>96.00%</td>
			<td>72.00%</td>
			<td></td>
			<td>82.67%</td>
		</tr>
<tr>
<td>ריצה 3</td>
			<td>132</td>
			<td>97</td>
			<td>73.48%</td>
			<td>26</td>
			<td>-</td>
			<td>26</td>
			<td>45</td>
			<td>97</td>
			<td>14</td>
			<td>-</td>
			<td>13</td>
			<td>28*</td>
			<td>27</td>
			<td>53.85%</td>
			<td></td>
			<td>50.00%</td>
			<td>62.22%</td>
			<td>56.70%</td>
		</tr>
<tr>
<td>ריצה 4</td>
			<td>130</td>
			<td>116</td>
			<td>89.23%</td>
			<td>36</td>
			<td>35</td>
			<td>-</td>
			<td>-</td>
			<td>71</td>
			<td>33</td>
			<td>34</td>
			<td>-</td>
			<td>-</td>
			<td>67</td>
			<td>91.67%</td>
			<td>97.14%</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>94.37%</td>
		</tr>
<tr>
<td>ריצה 5</td>
			<td>180</td>
			<td>148</td>
			<td>82.22%</td>
			<td>30</td>
			<td>30</td>
			<td>30</td>
			<td>30</td>
			<td>120</td>
			<td>26*</td>
			<td>25</td>
			<td>17</td>
			<td>24</td>
			<td>66</td>
			<td>86.67%</td>
			<td>83.33%</td>
			<td>56.67%</td>
			<td>80.00%</td>
			<td>76.67%</td>
		</tr>
<tr>
<td>ריצה 6</td>
			<td>180</td>
			<td>166</td>
			<td>92.22%</td>
			<td>-</td>
			<td>40</td>
			<td>40</td>
			<td>-</td>
			<td>80</td>
			<td>-</td>
			<td>35</td>
			<td>35</td>
			<td>-</td>
			<td>70</td>
			<td>86.67%</td>
			<td>87.50%</td>
			<td>87.50%</td>
			<td></td>
			<td>87.50%</td>
		</tr>
<tr>
<td>סך</td>
			<td>853</td>
			<td>737</td>
			<td>86.40%</td>
			<td>140</td>
			<td>154</td>
			<td>121</td>
			<td>75</td>
			<td>490</td>
			<td>89</td>
			<td>141</td>
			<td>83</td>
			<td>24</td>
			<td>337</td>
			<td>82.14%</td>
			<td>91.56%</td>
			<td>68.60%</td>
			<td>69.33%</td>
			<td>79.80%</td>
		</tr>
</tbody></table>טבלה 1: תוצאות טכניות של ניסויי הבקיעה השונים. הטבלה הנוכחית מדגישה את התוצאות של 6 סדרות של בקיעה ללא חיידקים שבוצעו: מספר הביציות שנאספו, הכדאיות של העובר ב -19 יום וגוזלים בקעו בר קיימא במבודדים השונים.

כאן אנו מתארים שיטה ליצירת אפרוחים ללא חיידקים מביצים של קו ברוילר מסחרי, Ross PM3. שיטה זו יכולה להיות מותאמת לדור של בעלי חיים ללא חיידקים ממיני עופות אחרים.

Studies of the gut microbiota contribution to the host physiology and immunocompetence are facilitated by the availability of germ-free animal models, ...

עד כה, ייצור ציפורים ללא חיידקים הוגבל לגזע בעלי חיים לצורך מחקר. אנו מראים כאן שאפשר לעשות זאת עם בעלי חיים מסחריים. טכניקה זו מאפשרת לבצע מחקרים על השפעת המיקרוביוטה באמצעות הרקע הגנטי של ציפורי משק.כאשר מנסים פרוטוקול זה, חשוב לשלוט בגידול המין הנבחר בתנאים הסטנדרטיים ולהיות בעלי ידע רב בעבודה במבודדים. התחל בהתקנת צינורות של 50 מיליליטר, פיפטות פלסטיק, הזנה מוקרנת, מים חיטוי ומיכלי פלסטיק אטומים סטריליים במבודד קשיח בלחץ חיובי. מלאו את מלכודת קוטל החיידקים ההעברה בתמיסת אמוניום רבעונית של 2% ועיקרו את המבודד שלוש פעמים עם אדי פורמלדהיד המעבירים את החומרים בתוך המבודד בין כל עיקור כדי להבטיח חיטוי של כל משטחי המגע.לפחות יומיים לפני הכנסת הביצים, הגדר את טמפרטורת המבודד ל -37 מעלות צלזיוס. ביום ההיכרות, הגדר את ההידרומטר ל-65 עד 70% מהלחות היחסית. לאחר בחירת ביצים נקיות וללא רבב, יש לטהר מיד את פני הביצה על ידי טבילתן בתמיסת חומצה פראצטית של 1.5% למשך חמש דקות, ולאחר מכן להעביר את הביצים למתקן הניסוי באמצעות קופסה מטוהרת באדי פורמלדהיד.אחסן את הביצים למשך 24 שעות בחום של 14 מעלות צלזיוס, ואז חזור על העיקור עם חומצה פראצטית של 1.5% והניח את הביצים בחממת בקיעה למשך 19 יום. ביום ה-19, ודא את הפוריות, הכדאיות וההתפתחות של העובר באמצעות נר ביצים בהיר בתנאים סטריליים. בחר ביצים חיות ועובריות וטהר אותן על ידי ריסוס בתמיסת חומצה פראצטית של 1.5% למשך 30 שניות או עד שכל פני השטח של כל ביצה מכוסים.העבירו את הביצים למבודדי הבקיעה הסטריליים ושטפו אותן במים דה-מינרליים סטריליים לפני שמניחים אותן בחלל הבקיעה. לאחר הבקיעה, החיות מוחזקות במבודדים הסטריליים, מוזנות אד ליביטום בתזונה מסחרית מעוקרת על ידי קרינת גמא ומושקות במי ברז אוטוקלאבים. יום לאחר הבקיעה, קחו דגימת צואה ישירות מפי הטבעת של אפרוחים שונים ואחסנו אותם בצינור זכוכית מעוקר.הוסף מיליליטר אחד של צואה לתשעה מיליליטר של מרק תיוגליקולט עם רזזורין והוסף את הדגימה הנותרת לתשעה מיליליטר של עירוי לב מוח או מרק BHI. דגרו את הצינורות בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס מבלי לנער במשך 18 עד 48 שעות. לאחר 18 שעות, בדוק ויזואלית את הצינורות עבור כל שינוי באמצעי הגידול.לאחר 48 שעות, קחו טיפה מאמצעי מרק הצואה של BHI, הניחו אותה על מגלשת זכוכית והתבוננו בה במיקרוסקופ. אם יש חשד לנוכחות חיידקים, קחו דגימה מתרבית BHI וזרעו אותה על צלחת אגר BHI, ואז דגרו את הצלחת בחום של 37 מעלות למשך 18 עד 48 שעות. אם מופיעות מושבות, זהה את החיידקים באמצעות טכניקה בעלת תפוקה גבוהה כגון ספקטרומטריית מסה MALDI-TOF.שש ריצות של יצירת אפרוחים ללא חיידקים נערכו עם ביצי ROSS PM3 שהגיעו משתי חוות צרפתיות שונות. בסך הכל נאספו 853 ביצים ולאחר שני שלבי טיהור ו-19 ימי דגירה, 86.40% היו ברי קיימא. מתוך הביצים הקיימות, 490 עברו שלב טיהור שלישי והוכנסו למבודדי בקיעה שונים בשיעור בקיעה ממוצע של 79.80%, זה מייצג שיעור בקיעה של 68.94% בהשוואה למספר הביצים הראשוני שנאספו.תוצאות הבקיעה משתנות באופן משמעותי בין 41.67% ל-88.16% מהאפרוחים בני הקיימא בהשוואה למספר הביצים שנאספו. השפעה זו הייתה בקורלציה ישירה עם גיל התרנגולות המטילות, שם ביצים שהגיעו מתרנגולות מבוגרות היו פחות ברות-קיימא. שש הריצות בוצעו באמצעות ארבעה מבודדי בקיעה שונים.לאחר הדברה בקטריולוגית, בעלי החיים מ-14 מתוך 16 המבודדים אושרו כנקיים מחיידקים, המקבילים לשיעור הצלחה של 86.5%נקודת המפתח של הליך זה היא שמירה על סטריליות המבודד. זה דורש עמידה בהליכי חיטוי ומעל לכל, שליטה על הכנסת האלמנטים דרך נעילת האוויר הנוזלית. הליך זה מספק לבעלי חיים למדוד את השפעת המיקרוביוטה על הפיזיולוגיה והבריאות של ציפורים.ניתן להתאים אותו ולהשתמש בו כדי לחקור מיקרוביוטה של ציפורים מחוות אחרות או חיות בר אם הביצים נגישות.

production-germ-free-fast-growing-broilers-from-commercial-line-for

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

אימונולוגיה וזיהומים

מקור: טיילור, מ.נ., et.al. שימוש בנתוני תולעת בודדת כדי לכמת הטרוגניות באינטראקציות חיידקיות-חיידקיות Caenorhabditis elegans. J. Vis. Exp. (2022)סרטון זה מדגים את החשיפה של תולעי Caenorhabditis elegans נטולות חיידקים ותואמות גיל לזן חיידקים לצורך קולוניזציה של המעי. זה מסביר את ההסרה הסלקטיבית של חיידקים חיצוניים שאינם נדבקים, ומשאירים רק חיידקים ברי קיימא דבוקים לאפיתל המעי לצורך כימות.

הערכת קולוניזציה של חיידקי מעיים ב - C. elegans נטול חיידקים

שיטה של גידול כרוב הנבט ללא חיידקים פותחה המאפשרת לחוקרים להעריך כיצד מינים בודדים או קהילות מיקרוביאלית מינים אינטראקציה על משטחים עלה כרוב. תמצית ירקות סטרילית מוצגת גם אשר ניתן להשתמש כדי למדוד משמרות בקומפוזיציה קהילתית במהלך תסיסה הירקות.

מערכת גנוטוביוטית לחקר מכלול המיקרוביאום בפילולספירה ובתסיסה הצמחית

פרוטוקול זה משמש להקמה ותחזוקה של מקקים אמריקאים גנוטוביוטיים(Periplaneta americana)על ידי חיטוי פני השטח של ארגזי הביצים (oothecae) לפני הבקיעה. חרקים גנוטוביוטיים אלה מכילים את האנדוסימביונים של בלטבקטריום המועברים אנכית, אך יש להם מעיים גרזניים.

הקמה ותחזוקה של מקקים אמריקאים גנוטוביוטיים (Periplaneta americana)

כדי להשיג חרק אקסני, משטח הביצה שלו מעוקר, והזחל הבוקע גדל לאחר מכן באמצעות עלים אקסניים. שיטה זו מספקת דרך יעילה להכנת חרקים אקסניים מבלי לתת אנטיביוטיקה או לפתח תזונה מלאכותית, אשר ניתן ליישם גם על חרקים אוכלי עלים אחרים.

הכנה וגידול של חרקים אקסניים עם שתילים מתרבית רקמה למחקרי אינטראקציה של מיקרוביוטה של המעי המארח של חיפושית העלים

מתואר הליך פשוט לגידול אנטיקווה דליה אקסנית עם דיאטות סטריליות מותססות למחצה. רק זן וולבכיה אחד זוהה בכל כוכב של אקסני D. antiqua באמצעות PCR.

גידול אקסני Delia antiqua עם דיאטות סטריליות מותססות למחצה

פרוטוקול זה מתאר את השלבים העיקריים להשגת עוברי דגים נטולי חיידקים (GF) ושמירה עליהם מהזחלים ועד לשלב הנעורים, כולל דגימה וגילוי מצבם הסטרילי. השימוש במודלים של GF עם זיהום חשוב להבנת תפקיד המיקרובים בבריאות המאכסן.

ייצור, תחזוקה וזיהוי של מודלים של דגי זברה נטולי חיידקים מזחלים ועד שלבים צעירים

הפרוטוקול מציג שתי מתודולוגיות לשיפור הבידוד של חיידקי מעיים אנאירוביים. הראשון מתמקד בבידוד של מגוון רחב של חיידקים באמצעות אמצעי תרבית שונים. השני מתמקד בשלבי הטיפוח של קבוצת חיידקים מסוימת, אולי הטמעת מיו-אינוסיטול, כדי להבין באופן מלא את משמעותה האקולוגית.

אסטרטגיות לשיפור טיפוח חיידקים אנאירוביים ממערכת העיכול של עוף

פרוטוקול זה מתאר מודל ביופילם פולימיקרוביאלי רלוונטי לארבעה מינים של סיסטיק פיברוזיס (CF), שניתן להשתמש בו כדי לחקור את ההשפעה של אינטראקציות בין מינים חיידקיים.

גידול ביופילם פולימיקרוביאלי רלוונטי לסיסטיק פיברוזיס כדי לחקור פנוטיפים קהילתיים

כאן, אנו מתארים את המבנה ונהלי ההפעלה, כולל אמצעי בלימה מיקרוביאליים של מתקן ל"עכברי פרא" באמצעות דגימת דם לאימונופנוטיפ כדוגמה.

נהלי הפעלה והכלה ביולוגית של מתקן לעכברי מעבדה עם מיקרוביום טבעי: נוהל אימונופנוטיפ

פרוטוקול זה מתאר את השיטות המומלצות להעברת עכברים ללא חיידקים למבודדים ניסיוניים בכלוב יחיד (איזוקאז'ים) תוך שמירה על תנאים סטריליים. נדונות שיטות להשתלת צואה בעכברים נטולי חיידקים ואיסוף חיידקים ברי קיימא מעכברים "אנושיים" אלה ליישומים נוספים.

הכנה ותחזוקה של ניסוי כלוב איזופוזיטיבי להדרה ביולוגית להשתלת צואה אנושית בעכברים נטולי חיידקים

שיטה זו מציגה את עובר התרנגולת כמודל פשוט וחסכוני in vivo להחייאת הפתוגן החיידקי L. monocytogenes ממצב בר-קיימא אך לא ניתן לתרבות (VBNC) ועם שימושים נוספים פוטנציאליים בהבנת מנגנוני תרדמת חיידקים.

עובר עוף כמודל in vivo להחייאת פתוגנים ברי קיימא אך לא ניתנים לתרבות

למדו שיטה לייצור אפרוחים נטולי חיידקים מביצי תרנגולות ברוילר מסחריות מקו Ross PM3. הטכניקה מאפשרת מחקרי מיקרוביוטה ברקע גנטי של עופות חווה.

ייצור של ברוילרים ללא חיידקים הגדלים במהירות מקו מסחרי ללימודי מיקרוביוטה

גלה סרטונים נוספים