Chromatographie sur couche mince

Source : Lara Al Hariri de l’Université du Massachusetts Amherst, MA, États-Unis

1. Préparation des solutionsExpand

   Ici, nous montrons la préparation en laboratoire pour 10 étudiants travaillant en binôme, avec un peu d’excès. Veuillez ajuster les quantités au besoin.

   • Avant de commencer, enfilez une blouse de laboratoire, des lunettes de sécurité et des gants en nitrile. Vous travaillerez avec de l'hexane, de l'éthanol et de l'acétate d'éthyle, qui imprègnent tous les gants minces en nitrile en quelques minutes, alors changez rapidement vos gants si vous mettez du solvant dessus.
   • Préparez des solutions de ~1 mg/mL de butylényléther phénylique, de phénol, d’acide benzoïque, d’aspirine, de caféine et d’acétaminophène. À l’aide d’une balance analytique ou d’une micropipette, mesurer environ 10 mg ou 10,7 μL d’éther butylphénylique dans un flacon en verre de 20 ml. note: L’éther butylphénylique est un liquide à température ambiante et doit être manipulé dans une hotte.
   • Mesurez 10 ml d’éthanol, ajoutez-le dans le flacon et étiquetez-le '1 mg/mL d’éther butylphénylique dans l’éthanol'.
   • Préparez les cinq autres solutions, en commençant par le phénol. Tarez un flacon en verre de 20 ml et mesurez-y 10 mg de phénol.
   • Ensuite, ajoutez 10 ml d’éthanol dans le flacon et mélangez le mélange avec une tige de verre jusqu’à ce que le phénol soit complètement dissous.
   • Boucher le flacon et l’étiqueter '1 mg/mL de phénol dans de l’éthanol'. Répétez ce processus pour préparer des solutions de 1 mg/mL d’acide benzoïque, d’aspirine, de caféine et d’acétaminophène. Rangez les flacons dans la hotte de l'instructeur ou dans un espace de travail commun.
   • Préparez les trois solutions inconnues d’analgésiques disponibles dans le commerce dans l’éthanol. Les formulations des comprimés peuvent varier, vous voudrez donc peut-être peser les comprimés à l’avance pour estimer le pourcentage de poids des ingrédients actifs.
   • Utilisez un petit mortier et un pilon pour réduire en poudre un comprimé d’acétaminophène. Mesurer 10 à 15 mg de la poudre dans un flacon en verre de 20 ml.
   • Ensuite, ajoutez 10 ml d’éthanol absolu dans le flacon et mélangez le mélange avec une tige de verre propre pendant 1 à 3 min. Ce n'est pas grave s'il reste du solide au fond du flacon.
   • Boucher le flacon et l’étiqueter 'Inconnu 1'. Jetez la poudre restante et nettoyez et séchez soigneusement le mortier et le pilon.
   • Utilisez 10 à 15 mg d’un comprimé d’aspirine écrasé pour préparer la solution inconnue 2 et 30 à 40 mg d’un comprimé écrasé contenant un mélange d’acétaminophène, d’aspirine et de caféine pour préparer la solution inconnue 3 de la même manière. Stockez les solutions inconnues avec les solutions connues.
   • Réalisez les mélanges de solvants que les étudiants utiliseront comme éluants. Préparez 100 ml d’un mélange de 60 % d’hexane et de 40 % d’acétate d’éthyle. Mesurez 60 ml d’hexane et versez-le dans un bécher de 250 ou 400 ml. Ajouter 40 ml d’acétate d’éthyle et remuer le mélange jusqu’à ce qu’il apparaisse homogène.
   • Étiquetez un flacon de 150 ml '60 % d’hexane, 40 % d’acétate d’éthyle (v/v)' et utilisez un entonnoir pour transférer la solution. Boucher la bouteille avant de la mettre de côté.
   • Fabriquer 100 mL d’un mélange de 90 % d’acétate d’éthyle et de 10 % d’hexane. Mesurez 10 ml d’hexane et versez-le dans un bécher de 250 ou 400 ml. Ajoutez ensuite 90 ml d’acétate d’éthyle et mélangez bien.
   • Étiquetez un flacon de 150 ml comme '90 % d’acétate d’éthyle, 10 % d’hexane (v/v)'. Transférez le mélange dans la bouteille et bouchez-la hermétiquement. Stockez les solvants et les mélanges de solvants dans une armoire inflammable.
2. Préparation du laboratoireExpand
   • Préparer ou obtenir des conteneurs à déchets pour le verre, l’iode et les déchets organiques non halogénés. Assurez-vous que chaque évier de laboratoire dispose d’une réserve d’essuie-tout.
   • Branchez et testez une petite lampe UV de 254 nm dans une zone partagée.
   • Installez une plaque chauffante dans une hotte centrale, étiquetez un bécher de 500 ml 'chambre à iode' et placez environ 1 à 2 g d’iode dans le bécher. Couvrez-le d’un grand verre de montre et placez-le sur la plaque chauffante.
   • Disposez la verrerie et l’équipement suivants à chaque poste de laboratoire des étudiants (nous suggérons aux étudiants de travailler en binômes) :

     3 bocaux en verre de 50 mL à bouchon vissé

     3 cylindres gradués de 10 mL

     1 crayon

     1 Stylo d’étiquetage

     1 Paire de pinces à épiler

     1 Petite règle avec incréments métriques

   • Étiquetez un flacon de 150 ml comme '100 % hexane', versez environ 100 ml d’hexane dans le flacon et bouchez-le hermétiquement. Rangez le flacon de stock d’hexane et placez les mélanges d’hexane et d’acétate d’éthyle dans le capot de solvant avec le flacon d’hexane pur.
   • Disposez les six solutions connues et les trois solutions inconnues sur une paillasse partagée.
   • Placez à proximité des récipients de capillaires en verre jetables, de papiers filtres de taille moyenne et de plaques TLC.
   • Au début du labo, attribuez au hasard un composé inconnu à chaque groupe d’étudiants.
   • Une fois que certains élèves sont à peu près à mi-chemin du premier développement, chauffez l’iode à 110 °C sur la plaque chauffante.
   • Après le labo, laissez refroidir le bécher et éliminez les déchets iodés de manière appropriée.