L'Électrophorèse SDS-PAGE

L’électrophorèse sur gel de dodécylsulfate de sodium-polyacrylamide ou SDS-PAGE est une technique basée sur le poids moléculaire qui sépare les mélanges de protéines en fonction de leur taille.

Ici, les protéines de l’échantillon sont traitées avec du β-mercaptoéthanol et du SDS.

β-mercaptoéthanol est un agent réducteur qui rompt les liaisons disulfure.

Le SDS, un détergent chargé négativement, se lie aux régions hydrophobes pour déplier et dénaturer les protéines et ajoute une charge négative uniforme.

Les échantillons sont ensuite chargés sur un gel de polyacrylamide composé de monomères d’acrylamide réticulés.

Le gel empilable par le haut a de grands pores en raison de la faible concentration d’acrylamide.

Lors de l’application de tension, les échantillons de protéines s’empilent comme des pièces de monnaie pour pénétrer simultanément dans le gel de résolution inférieur.

Le gel résolvant a des pores plus petits en raison d’une concentration plus élevée d’acrylamide. Il agit comme un tamis moléculaire, permettant aux protéines plus petites de fonctionner plus rapidement, séparant ainsi les protéines en fonction de leur taille.

Ces bandes de protéines séparées sont couramment visualisées à l’aide de la coloration au bleu de Coomassie. Le poids moléculaire de chaque bande peut être déterminé à l’aide de protéines marqueurs de référence.