Microscopie à Fluorescence Super-Résolution

La microscopie à fluorescence conventionnelle ne peut résoudre que des structures plus éloignées que 200 nm. En effet, sous un microscope, la diffraction de la lumière fait apparaître les molécules fluorescentes comme des taches floues au lieu de points acérés. Par conséquent, lorsque les objets sont très proches les uns des autres, leurs images se chevauchent.

Par conséquent, les scientifiques ont mis au point des techniques de super-résolution qui offrent une meilleure résolution pour imager même de petites structures subcellulaires. Ces techniques surmontent les limites de diffraction en utilisant des motifs spécifiques de lumière pour exciter les fluorophores dans l’échantillon.

Par exemple, la microscopie à éclairage structuré utilise un motif rayé qui est ensuite tourné pour capturer plusieurs images. Les images sont combinées, créant un motif d’interférence qui est traité par calcul pour créer l’image finale.

La microscopie à déplétion par émission stimulée crée un motif à l’aide de deux lasers. Un laser primaire excite l’échantillon tandis qu’un faisceau en forme de beignet supprime la fluorescence autour de lui, ce qui fait paraître le point fluorescent plus petit.

D’autres techniques évitent le chevauchement des signaux en utilisant des sondes fluorescentes qui peuvent être activées et désactivées. Seules quelques sondes sont activées pour chaque image, ce qui minimise le chevauchement des signaux et permet la localisation d’une seule molécule fluorescente.

Un grand nombre de ces images peuvent être combinées en une seule image composite haute résolution.