Fluorescence et phosphorescence: instrumentation

Les fluorimètres et les spectrofluorimètres sont deux instruments utilisés pour mesurer la fluorescence moléculaire, chacun doté d’une source lumineuse, de filtres ou de monochromateurs, d’une cellule d’échantillonnage, d’un transducteur et d’un processeur de signal.

Les fluorimètres utilisent des lampes à vapeur de mercure à basse pression comme source d’excitation, en utilisant des filtres d’absorption ou d’interférence pour sélectionner les longueurs d’onde d’excitation et d’émission.

À l’inverse, les spectrofluorimètres utilisent une lampe à arc au xénon à haute pression et un monochromateur pour sélectionner les longueurs d’onde d’excitation et d’émission.

Les deux appareils détectent la fluorescence à travers un transducteur, tel qu’un tube photomultiplicateur ou un dispositif à couplage de charge, convertissant le signal en une mesure électrique.

La phosphorescence moléculaire est mesurée à l’aide d’un phosphorimètre, qui tient compte du délai entre l’excitation et l’émission de phosphorescence à l’aide de hacheurs rotatifs déphasés.

Ces hacheurs bloquent alternativement l’émission fluorescente lors de l’excitation et la source d’excitation lors de la mesure de l’émission phosphorescente.

Ici, l’échantillon est soit dissous dans un mélange de solvants organiques et congelé à des températures d’azote liquide, soit immobilisé sur un substrat solide pour empêcher la désactivation de l’état excité par conversion externe.