Homing des cellules hématopoïétiques de la moelle osseuse

Résumé

Cet article décrit un protocole utilisé pour étudier le homing des cellules hématopoïétiques à leurs niches dans la moelle osseuse.

Résumé

Homing est le phénomène par lequel les cellules hématopoïétiques transplantés sont capables de se rendre et se greffent ou établir sa résidence dans la moelle osseuse. Chemomkines divers récepteurs sont impliqués dans la domiciliation des cellules souches hématopoïétiques. [1, 2]

Ce document décrit le protocole classique de homing utilisés dans les études de cellules souches hématopoïétiques. En général il s'agit d'isoler la population de cellules dont la tête chercheuse doit être étudiée, la coloration de cette population avec un colorant d'intérêt et l'injection de ces cellules dans le sang d'un animal receveur. L'animal receveur est ensuite sacrifié à un moment prédéterminé après l'injection et la moelle osseuse évaluée par le pourcentage ou le nombre absolu de cellules qui sont positifs pour la teinture d'intérêt. Dans l'un des régimes les plus courants expérimentaux, l'efficacité homing des cellules hématopoïétiques à partir de deux animaux génétiquement distinctes (un animal de type sauvage et les correspondants knock-out) est comparé. Cet article décrit le protocole de cellules hématopoïétiques homing dans le cadre de tels que l'expérimentation.

Protocole

1. Nous commençons l'expérience homing en extrayant les cellules pour être utilisé dans l'expérience. Pour cette expérience actuelle nous sommes intéressés à savoir si le homing de la moelle osseuse à l'ensemble des niches dans les os longs des animaux receveurs est différent pour les cellules de moelle osseuse extraites d'animaux tels que WT C57BL/6J (WT) et ceux qui sont transgéniques KO pour le récepteur lysophosphatidique 1 (lpar1) (KO).
2. Avant de commencer l'expérience, nous allons recueillir les matériaux nous avons besoin pour cette expérience. Dans notre laboratoire tous les dissections de souris sont effectuées dans une hotte à flux laminaire de cu....

Discussion

Homing est le processus par lequel les cellules de moelle osseuse, y compris les cellules souches, les cellules progénitrices et des cellules différenciées, leur chemin dans la moelle osseuse, après avoir été injecté dans le flux sanguin ou une cavité de moelle osseuse de souris. Comme il est évident à partir de la définition, un scientifique peut choisir d'étudier la domiciliation des cellules souches hématopoïétiques, les cellules progénitrices ou des cellules différenciées identifiés par immunophénotypage et isol.......

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
DPBS (solution saline tamponnée au phosphate de Dulbecco’s)	Mediatech, Inc.	21-031-CV
Sérum de veau fœtal stérile	Valley Biomedical, Inc.	BS3033
EDTA 0,5 M (pH 8,0)	Boston BioProducts	BM-150
Solution de bleu de trypan	Mediatech, Inc.	25-900-CI
Buffer lysant ACK	Lonza Inc.	10-548E
Isoprotérol U.S.P.	Denison Pharmaceuticals, Inc
Solution de marquage cellulaire Vybrant DiD	Invitrogen	V22887
Solution de marquage cellulaire Vybrant DiI	Invitrogen	V22885