Article de méthode

Microinjection d'ARNm et oligonucléotides antisens morpholino dans embryons de poissons zèbres.

DOI :

10.3791/1113

⸱

7 mai 2009

 , 
1Department of Genetics, Yale University School of Medicine

Dans cet article

Résumé

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La microinjection est une méthode bien établie et efficace pour introduire des substances étrangères dans des embryons de poisson zèbre fécondé. Ici, nous démontrons une technique de microinjection robustes pour effectuer une surexpression d'ARNm, et morpholino oligonucléotides études de génétique chez le poisson zèbre knockdown.

Résumé

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Un outil essentiel pour étudier le rôle d'un gène au cours du développement est la capacité à effectuer inactivation génique, surexpression, et des études misexpression. Dans le poisson zèbre (

Protocole

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Partie 1: Préparation de micropipettes, et les plaques de la chambre de microinjection

  1. Fabriquer micropipettes en chauffant et en tirant des tubes capillaires en verre borosilicate (World Precision Instruments, Inc, 1B100-4) dans un dispositif extracteur micropipette (Sutter Instruments Inc, Flaming / Brown P-97). Conserver dans une boîte de Pétri sur le dessus d'une petite quantité d'argile ou de ruban adhésif.
  2. Verser 1,5% d'agarose (American Bioanlytical, Inc, AB00972-00500) dans des plaques de milieu 1x E3 moulé avec des creux en forme de coin qui servira une méthode facile pour la tenue des embryons lors de l'injection (comme décrit dans ....

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Discussion

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Microinjection dans des embryons de poisson zèbre est une technique bien établie et solide pour explorer le rôle d'un gène particulier dans le développement. Les applications incluent la surexpression, misexpression, et des dosages knockdown de votre gène d'intérêt ainsi que l'analyse épistatique entre les gènes multiples. Microinjection chez le poisson zèbre a été largement utilisé pour générer des animaux transgéniques, et la cartographie du destin cellulaire au début embryons blastula 5,6,7,8,9.

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Remerciements

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Ce travail a été soutenu par le NIH et PKD Foundation pour ZS. Toutes les expérimentations animales ont été réalisées en fonction de Yale Centre de Ressources animales (YARC) et institutionnel de protection des animaux et utilisation comité (IACUC) des lignes directrices.

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Matériaux

Tous les autres matériaux sont énumérés dans le protocole.

Références

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  1. Westerfield, M. The zebrafish book. A guide for the laboratory use of zebrafish (Danio rerio). , 4th, University of Oregon. (2000).
  2. Nasevicius, A., Ekker, S. Effective targeted gene 'knockdown' in zebrafish. Nat Genet. 26, 216-220 (2000).
  3. Draper, B., Morcos, P., Kimmel, ....

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Mots-clés

Microinjection d ARNminactivation g niquesurexpression d EGFPpr paration de micropipettestalonnage du volume d injectioninjection cytoplasmique dans le vitellusmarqueur au rouge ph nolincubation d embryons

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