Surveillance des hormones végétales Durant les réponses au stress

Résumé

Une méthode simple est fourni qui permet l'extraction rapide et l'analyse des hormones végétales multiples à partir de petits échantillons de tissu. La procédure utilise l'extraction en phase vapeur comme l'étape de purification solennelle. Les échantillons sont analysés par des ions + GC / MS avec ionisation chimique qui produit principalement des (M +1).

Résumé

Les hormones végétales et des composés apparentés de signalisation jouent un rôle important dans la régulation des réponses des plantes à divers stimuli environnementaux et les contraintes. Parmi les contraintes les plus sévères sont insectes herbivores, une infection pathogène, et la sécheresse. Pour chacune de ces contraintes un ensemble spécifique d'hormones et / ou de leurs combinaisons sont connues pour affiner les réponses, assurant ainsi la survie de la plante. Les principales hormones impliquées dans la régulation de ces réponses sont l'acide jasmonique (JA), l'acide salicylique (SA), et l'acide abscissique (ABA). Pour mieux comprendre le rôle des hormones individuelles ainsi que leur interaction potentielle lors de ces réponses, il est nécessaire de surveiller les changements dans leur abondance dans un temporel aussi bien que de façon spatiale. Pour la quantification facile, sensible et reproductible de ces signaux et d'autres composés que nous avons développé une méthode basée sur l'extraction en phase vapeur et la chromatographie gazeuse / spectrométrie de masse (GC / MS) (1, 2, 3, 4). Après l'extraction de ces composés à partir des tissus végétaux par aqueuse acide 1-propanol mélangé avec de l'acide dichlorométhane contenant des composés carboxyliques sont méthylés, volatilisés par la chaleur, et recueilli sur un absorbant polymères. Après élution dans un flacon d'échantillon des analytes sont séparés par chromatographie gazeuse et détectés par spectrométrie de masse à ionisation chimique. L'utilisation de normes internes appropriées permet alors de la simple quantification en reliant les zones pic de l'étalon analyte et internes.

Protocole

1. Nous devons d'abord préparer le bouchon à vis 2ml flacons pour l'extraction: Ajouter un tampon d'extraction 400ul (1-propanol: H2O: HCl concentré 2:1:0.002 vol / vol / vol) et 10 pi de la norme interne respective (10ng/μl ) dans un flacon. Gel dans l'azote liquide, puis ajouter les perles en céramique.
2. Ajouter de la matière végétale (entre 50 et 200mg) alors les flacons sont toujours positionnés dans l'azote liquide. Notons que le poids de la matière végétale ajoutée doit être estimé avant tout autre traitement pour permettre à plus tard pour la quantification exacte, qui est basé sur le poids frais.
3. Assurez-vous que tout l'azote liquide e....

Discussion

La méthode présentée ici a été prouvée à travailler de manière fiable pour un large éventail de composés végétaux de signalisation condition que la taille et la nature chimique du composé ne l'empêche pas d'être extraite, méthylé, et vaporisé. En outre, la procédure de méthylation comme il est décrit ici n'est pas le seul moyen de dérivation. Silyllation et l'acétylation des méthodes alternatives et des protocoles peuvent être facilement trouvés en ligne.

Si le spectromètre d.......