Protocole pour la vaccine infection de cellules HeLa et l'analyse de l'hôte et l'expression des gènes viraux.
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Article de méthode
Infection virus de la vaccine et l'analyse temporelle de l'expression des gènes de virus: Partie 1
Dans cet article
Résumé
Résumé
La famille
Protocole
Partie 1: Mise en place de l'infection
- Cultiver des cellules HeLa dans des flacons et attendre que les cellules sont d'environ 80% de confluence.
- Préparez assez moyennes croissance virale de l'expérience: régulière DMEM avec 2% de FBS et sans antibiotiques ajoutés.
- L'infection peut être réalisée soit avec un stock brut de virus de la vaccine avec un titre connu, ou saccharose virus purifié avec un titre connu, si vous êtes préoccupé par l'expression du gène hôte.
- Si vous utilisez le virus du saccharose purifié, passez directement à la partie 2.
- Si vous utilisez un stock de virus vaccine brut, just....
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Discussion
Étapes critiques
Partie 1 & 2
Il ya plusieurs étapes essentielles à la mise en place d'une infection synchrone de la vaccine, le premier en faisant attention de sonication (ou trypzinizing) du virus, afin de désagréger les particules virales. Vaccine est fortement sujette à l'agrégation, et la perturbation des particules de virus est importante pour assurer même l'infection de cellules. Afin d'atteindre une infection synchrone, une MOI élevé (supér.......
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Remerciements
Whitehead Institute Fellows Fonds
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Matériaux
| Nom | Entreprise | Numéro de catalogue | Commentaires | |
|---|---|---|---|---|
| Réactif TRIzol | Réactif | Invitrogen | 15596-026 | Des réactifs similaires, tels que TriPure de Roche, fonctionnent également. |
| Réactif de séparation des phases BCP | Réactif | Molecular Research Center | BP151 | |
| Kit d'ADNase sans RNase | Réactif | Qiagen | 79254 | Le traitement par ADNase est une étape facultative. |
Références
- KH, R. ubins, LE, H. ensley, GW, B. ell, Wang, C., EJ, L. efkowitz, PO, B. rown, DA, R. elman Comparative analysis of viral gene expression programs during poxvirus infection: a transcriptional map of the vaccinia and monkeypox genomes. PLoS ONE. 3 (7), e2628-e2628 (2008).
- Assarsson, E., Greenbaum, J. A., Sundström, M., Schaffer, L., Hammond, J. A., Pasquetto, V., Oseroff, C., Hendrickson, R. ....
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Réimpressions et autorisations
