Objectif transplantation chez le poisson zèbre et son application dans l'analyse de mutants Eye

Résumé

Objectif de développement implique des interactions avec d'autres tissus. Plusieurs mutants oeil de poisson zèbre sont caractérisés par une taille anormalement petite lentille. Ici nous démontrons une expérience de transplantation objectif pour déterminer si ce phénotype est dû à des causes intrinsèques ou des interactions défectueuses avec les tissus qui entourent la lentille.

Résumé

L'objectif joue un rôle important dans le développement de la cupule optique ^[1,2]. En utilisant le poisson zèbre comme organisme modèle, les questions concernant le développement lentille peut être adressée. Le poisson zèbre est utile pour des études génétiques en raison de plusieurs caractéristiques avantageuses, y compris de petite taille, taux de fécondité élevé, cycle de vie court, et la facilité d'entretien. Objectif de développement se produit rapidement chez le poisson zèbre. Par 72 HPF, la lentille de poisson zèbre est fonctionnellement matures ^[3]. L'abondance des ressources génétiques et moléculaires sont disponibles pour soutenir la recherche dans le poisson zèbre. En outre, la similitude de l'œil de poisson zèbre à ceux des autres vertébrés fournit une base pour son utilisation comme un modèle animal d'excellents défauts de l'homme ^[4-7]. Plusieurs mutants poisson zèbre présentent des anomalies lentilles, y compris des niveaux élevés de mort cellulaire, ce qui dans certains cas, conduit à une dégénérescence complète des tissus lentille ^[8].

Afin de déterminer si des anomalies de lentilles sont dus à des causes intrinsèques ou à défaut les interactions avec les tissus environnants, la transplantation d'une lentille mutant dans un oeil de type sauvage est effectuée. L'utilisation d'aiguilles métalliques polies au feu, les lentilles de mutant ou de type sauvage sont soigneusement disséquées de l'animal donneur, et transférés dans l'hôte. Afin de distinguer les tissus de type sauvage et mutant, une lignée transgénique est utilisé comme donneur. Cette ligne exprime membranaires GFP dans tous les tissus, y compris l'objectif. Cette technique de transplantation est un outil essentiel dans les études de mutants lentilles poisson zèbre.

Protocole

Partie 1: Préparation des embryons

Dans ce protocole, nous allons utiliser le symbole JJ ^xy pour désigner un mutant de poisson zèbre hypothétique objectif.

1. Zebrafish souches sont maintenus dans des conditions standard de facilité de poissons à 28,5 C sur un cycle de 14h light/10h sombre.
2. Dans la soirée, les mâles et les femelles lieu du poisson-zèbre souche JJ ^xy: AB / TU; tg (mGFP) dans un réservoir avec un diviseur de les séparer les uns des autres. La descendance de ce croisement exprimeront le transgène GFP dans tous les tissus, et seront utilisés comme donneurs. En parallèl....

Discussion

Plusieurs étapes nécessitent une attention particulière lors de transplantations d'objectif.

1. Aiguisé aiguilles: Il est préférable de préparer plusieurs aiguilles avant d'effectuer la transplantation lentilles, et la pointe de l'aiguille doit être aussi mince que possible. Une aiguille plus épaisse va déchirer plus de tissu en raison de son plus grand diamètre, provoquant une panne dans les yeux pour guérir.
2. Organiser les embryons: Juste avant la transplantation, vous devez positionner .......

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Fil de tungstène de 0,1 mm de diamètre	A Johnson Matthey	45086
Agarose (point de fusion bas)	Sigma-Aldrich	39346
Capillaires en verre borosilicaté	World Precision Instruments, Inc.	TW 100-4
Pinces	Dumont	11252-30
Pipette de Pasteur	Fisher Scientific	13-678-20C
Pompe pour pipette	Fisher Scientific	13-683C
Boîte de Pétri	Cardinal Health	D1906
Pénicilline-streptomycine	GIBCO, par Life Technologies	15140-122