Transfection d'ADN des mammifères muscles squelettiques à l'aide In Vivo L'électroporation

Résumé

Nous décrivons des procédures détaillées pour la transfection efficace de l'ADN plasmidique dans les fibres des muscles du pied des souris vivantes en utilisant l'électroporation et la visualisation ultérieure de l'expression des protéines en utilisant la microscopie à fluorescence.

Résumé

Un intérêt croissant pour la biologie cellulaire est d'exprimer des formes modifiées transgénique de protéines essentielles (par exemple les constructions fluorescence marqués et / ou de variants mutants) afin d'étudier leur distribution endogène et de la pertinence fonctionnelle. Une approche intéressante qui a été mis en œuvre pour atteindre cet objectif dans les cellules complètement différenciées est le

Protocole

Procédures expérimentales pour l'électroporation in vivo de muscles FDB et IO

1. Avant de commencer l'électroporation in vivo dans des protocoles, des plasmides d'expression mammifère doit être amplifié pour produire de concentration dans la gamme de à 2-5 mg Remarque plasmidique / ul de TE:. Nous utilisons régulièrement des kits d'amplification commerciaux et suivre les procédures du fabricant. Plasmides d'expression commerciaux transportant le travail promoteur CMV très bien dans le muscle squelettique de transfections in vivo.
2. Aliquoter le volume nécessaire (10-20 pi) de la solution de plasm....

Discussion

Nous décrivons ici les étapes détaillées qui doivent être suivies afin d'atteindre transfections efficace de plasmides ADN dans les fibres musculaires squelettiques par électroporation in vivo. Les principaux avantages de notre approche sont la simplicité de mise en œuvre et son caractère invasif minimal qui en résulte risque négligeable pour la santé des animaux. En réalité, les protocoles ci-dessus décrite électroporation n'entraînent pas beaucoup plus que les injections sous-cutanées deux par pied, s.......