Les
expériences sur les animaux ont été menées conformément à la disposition et à la recommandation générale de la législation chinoise sur l’administration des animaux de laboratoire et ont été approuvées par le Comité de l’Institution de soin et d’utilisation des animaux de l’Université de médecine de la capitale (Réf. no. AEEI-2014-052). Des souris Balb/c femelles âgées de 6 à 8 semaines ont été utilisées.
1. Préparation des cellules et des animaux
- Un jour avant l’opération, rasez les poils autour du quatrième mamelon pour exposer la zone opératoire.
- Utilisez une main pour tenir fermement la souris à l’arrière pour vous assurer qu’elle ne bouge pas librement, tournez la souris pour exposer son ventre à l’opérateur, puis utilisez une autre main pour raser la fourrure autour du quatrième mamelon avec un rasoir électronique.
- Mettez une fine couche de crème dépilatoire autour des mamelons pendant 30 à 60 secondes, nettoyez la crème avec de l’eau distillée, puis séchez la souris avec du papier doux.
- Le jour de l’opération, prélevez des cellules cancéreuses du sein murines (4T1-luc2), comptez le nombre de cellules et ajustez la densité cellulaire à 2 x 105 cellules/ml dans une solution saline tamponnée au phosphate (PBS) dans des tubes de microcentrifugation stériles et conservez-les sur de la glace. Pour chaque souris, 1 x 104 cellules/50 μL dans une seringue de 1 mL est préparée.
2. Injection orthotopique
- Anesthésie de souris
- Induire une anesthésie. Mettez les souris dans un récipient transparent fermé et allumez du gaz isoflurane à 2 % pour anesthésier les souris pendant environ 5 minutes, jusqu’à ce qu’elles se couchent toutes et s’endorment.
- Maintenez l’anesthésie. Transférez les souris du récipient dans des masques d’anesthésie individuels, mettez une pommade vétérinaire sur leurs yeux pour éviter la sécheresse, maintenez les souris en position couchée avec leurs mamelons exposés à l’opérateur et laissez-les continuer à inhaler du gaz isoflurane pendant quelques minutes jusqu’à ce que l’injection ait été effectuée.
- Confirmer le succès de l’anesthésie par l’absence de réflexe de retrait du pincement de l’orteil.
- Appliquez une pommade ophtalmique sur les yeux des souris pour prévenir la sécheresse oculaire.
NOTE En fonction de la taille du récipient et du nombre de masques d’anesthésie individuels disponibles, un groupe de souris peut être anesthésié ensemble et injecté un par un sous anesthésie individuelle.
- Performance de l’injection
- Utilisez une main pour enrouler la peau autour du quatrième mamelon à l’aide d’une pince à épiler, afin de créer un « tunnel » soulevé pour que la seringue suive. Utilisez l’autre main pour tenir la seringue avec l’aiguille tournée vers le haut pour pénétrer dans la peau par voie sous-cutanée à 5 - 10 mm du mamelon ; Ensuite, suivez le « tunnel » jusqu’à ce que la pointe de l’aiguille se rapproche du mamelon, déplacez soigneusement la pointe de l’aiguille vers le haut dans le coussinet adipeux mammaire jusqu’à ce que l’œil de l’aiguille passe sous l’extrémité du mamelon, jetez la pince à épiler et injectez les cellules lentement.
- Tournez un peu l’aiguille et rétractez lentement la seringue ; utilisez un coton-tige pour appuyer sur la plaie de l’aiguille pendant 10 à 20 secondes pour vous assurer qu’il n’y a pas d’infiltration de liquide.
- Observez le quatrième mamelon pour confirmer que l’injection a réussi : on peut observer une sphère plate blanche transparente avec le mamelon comme centre (Figure 1).
- Gardez les souris anesthésiées pendant une minute supplémentaire pour éviter de laisser les souris récupérer et se déplacer trop rapidement, ce qui provoquera l’ouverture de la plaie d’injection et la fuite des cellules tumorales.
