1. Étalonnage des paramètres de suivi vidéo
- Avant les mesures comportementales, définissez les paramètres d’observation et d’étalonnage dans le logiciel de suivi vidéo (voir Tableau des matériaux).
- Placez une plaque de puits dans la chambre d’enregistrement avec au moins 1 larve de poisson dans un puits individuel. Utilisez la plaque et les poissons associés comme représentations pour définir les paramètres d’étalonnage.
- Dans le logiciel de suivi vidéo, cliquez sur "Fichier | Générer le protocole », ce qui ouvrira une boîte de dialogue « assistant de création de protocole ». Dans le champ « Nombre d’emplacements », entrez le nombre de puits individuels de la plaque de puits, puis cliquez sur « OK ».
- En haut de l’écran, cliquez sur « Afficher | Plein écran », ce qui incitera le système à afficher une vue aérienne de la plaque du puits.
- Cliquez sur l’icône « Dessiner des zones », qui apparaît sous la forme de trois formes multicolores. À droite de la zone d’observation de la plaque de puits, sélectionnez l’icône circulaire dans le champ intitulé « Zones ».
- Utilisez le curseur pour délimiter la zone de suivi vidéo circulaire dans le puits supérieur gauche de la plaque de puits. Sélectionnez « Repère en haut à droite », puis tracez le contour de la zone d’affichage du puits en haut à droite. Ensuite, sélectionnez « Bottom Mark » pour bien délimiter le bas à droite.
REMARQUE : Après avoir dessiné le contour circulaire, sa position devra probablement être ajustée. Pour ajuster la position du contour, cliquez sur « sélectionner », puis utilisez le curseur pour déplacer la zone délimitée. De plus, les contours peuvent être répliqués en cliquant sur « Copier » puis sur « Coller ».
- Une fois que les zones de suivi de puits en haut à gauche, en haut à droite et en bas à droite ont été définies, cliquez sur « Construire » pour demander au logiciel de délimiter automatiquement les zones de visualisation des puits restants.
- Dans la zone intitulée « Calibrage », cliquez sur « Dessiner l’échelle ». Utilisez le curseur pour tracer une ligne horizontale sur la plaque. Une fois la ligne tracée, une boîte de dialogue intitulée « Mesure d’étalonnage » apparaîtra. Entrez la longueur de la plaque de puits et cliquez sur « OK ».
- Quittez le gestionnaire de dessins en cliquant sur l’icône « Dessiner des zones ».
- Cliquez sur l’icône « Tuiles ». À l’aide du curseur, mettez en surbrillance toutes les cases qui apparaissent sur l’écran de visualisation afin que chaque case soit verte.
REMARQUE : L’icône des tuiles apparaît sous la forme d’un groupe de six petits carrés individuels
- "Cliquez sur Afficher| plein écran". À droite de la zone de visualisation de la plaque, cliquez sur « Bkg » dans la case intitulée « Seuil de détection ». Utilisez la barre de réglage du seuil pour définir le seuil de détection des pixels. Une fois que le seuil de détection de pixels approprié est sélectionné, cliquez sur « Appliquer au groupe ».
REMARQUE : Ce protocole fixe le seuil de détection à 13 en mode noir pour les observations de poisson-zèbre et à 110 en mode transparent pour les observations de tête-de-boule.
- Dans la case intitulée « Seuil de mouvement », entrez les paramètres de suivi de vitesse de déplacement souhaités. Une fois les paramètres de vitesse définis, cliquez sur « Appliquer au groupe ».
REMARQUE : Ce protocole définit les mouvements petits/grands à 20 mm/s et les mouvements inactifs/petits à 5 mm/s. Ces sélections programment le logiciel pour suivre les mouvements des larves de poissons à trois niveaux de vitesse différents : inactif (congélation) = <5 mm/s, petit (croisière) = 5 à 20 mm/s et grand (éclatement) = >20 mm/s.
- Cliquez sur "Paramètres | Paramètres de protocole" dans le menu déroulant. Dans la boîte de dialogue, sélectionnez l’onglet « Temps ». Entrez le temps d’observation et le temps d’intégration. Une fois les paramètres saisis, cliquez sur « Ok ».
- Pour régler les durées de photopériode claire/sombre et l’intensité lumineuse pour chaque photopériode, ouvrez la boîte de dialogue des paramètres du pilote de lumière en sélectionnant « Light Driving » dans le menu déroulant « Parameters
REMARQUE : Voir la vidéo de protocole pour régler plusieurs photopériodes claires-sombres.
- Une fois les paramètres de suivi vidéo définis, enregistrez le protocole d’observation.
REMARQUE : Ce protocole observe le comportement des poissons sur une période de 50 minutes qui comprend une phase d’acclimatation de 10 minutes suivie de 4 phases de modification de la lumière et de l’obscurité composées de deux périodes de lumière de 10 minutes et de deux périodes d’obscurité de 10 minutes. Le temps d’intégration est défini pour mesurer le comportement pour chaque minute de l’essai comportemental de 50 minutes.
2. Observation du comportement locomoteur et photomoteur des larves de poissons
- Placez la plaque de puits contenant les poissons expérimentaux dans la chambre d’enregistrement comportemental.
- Dans le logiciel de suivi vidéo, ouvrez le protocole de suivi développé à l’étape suivante.
- Dans la visionneuse de suivi vidéo, assurez-vous que toutes les larves sont visibles sur l’écran de l’ordinateur, qu’une seule larve est présente dans chaque puits et que les puits individuels sont alignés dans les zones d’observation définies aux étapes 1.1.5 et 1.1.6.
- Cliquez sur « Expérimenter | Exécuter".
REMARQUE : Le système demandera à l’utilisateur de fournir un nom et un emplacement pour enregistrer les données d’observation.
- Une fois le nom et l’emplacement d’enregistrement des données d’observation renseignés, cliquez sur l’icône « Plusieurs images en direct » pour mettre en surbrillance toutes les zones de visualisation prédéfinies
REMARQUE : Cette icône est située en haut de l’écran de l’ordinateur et apparaît sous la forme d’une boîte divisée en quatre carrés plus petits. En cliquant sur cette icône, vous mettrez en surbrillance toutes les zones d’affichage prédéfinies.
- Fermez le panneau de la chambre d’enregistrement et cliquez sur « Arrière-plan | Démarrer" sur l’écran de l’ordinateur.