Escape Response Assay : Une méthode pour étudier la réponse des larves de poisson-zèbre aux stimuli tactiles

Résumé

Source : Sztal, T. E., et al. Utilisation des tests de réponse et de locomotion évoqués par le toucher pour évaluer les performances et la fonction musculaires chez le poisson-zèbre. J. Vis. Exp.(2016)

Cette vidéo décrit le test de réponse tactile, qui mesure la réponse de la larve de poisson-zèbre aux stimuli tactiles.

Protocole

1. Essai de réponse évoquée par le toucher

1. Préparation de 2 embryons dpf pour le test de réponse évoquée par le toucher
   1. Assurez-vous que le moment de la journée auquel l’essai est effectué est le même d’une expérience à l’autre, car l’activité peut varier considérablement tout au long de la journée.
      REMARQUE : L’expérience doit être réalisée à l’insu et l’ordre des tests doit être randomisé afin de minimiser les artefacts expérimentaux.
   2. Attribuez aux souches de poissons un numéro, qui n’est pas connu de la personne qui effectue l’expérience. Ensuite, à l’aide d’outils en ligne disponibles gratuitement, vous générez une liste aléatoire qui dicte l’ordre des tests.
   3. Au moins une heure avant le test, déchorionnez les embryons en déchirant un trou dans le chorion et en séparant doucement le chorion à l’aide d’une pince à épiler fine. Retirez tous les débris de la boîte de Pétri avant de retourner dans l’incubateur à 28 °C.
2. Réalisation d’un test de réponse évoquée par le toucher
   1. Chauffer à 28 °C au moins 15 minutes avant de commencer l’essai.
      REMARQUE : Cette étape est contrôlée en température et restera à 28 °C pendant toute la durée de l’essai. La température affectera l’activité et il est donc important de maintenir une température constante. Si un étage chauffé n’est pas disponible, la température de l’eau doit être surveillée et toutes les expériences doivent être menées à la même température.
   2. Placez une boîte de Pétri remplie de milieu embryonnaire (5 mM de NaCl, 0,17 mM de KCl, 0,33 mM de CaCl₂, 0,33 mM de MgSO₄ dans l’eau) sur une scène éclairée et montez la caméra haute vitesse sur la boîte de Pétri.
   3. Lancez le logiciel d’enregistrement de la caméra vidéo (tel que Stream Pix 5, décrit ici) et sous l’onglet « espace de travail », sélectionnez 1 000 images par seconde (1 000 ips) comme vitesse de capture pour vous assurer que l’action de nage rapide du poisson est enregistrée.
   4. En travaillant avec un embryon à la fois, placez l’embryon au milieu de la boîte de Pétri avec le poisson-zèbre clairement visible dans le champ de vision.
      REMARQUE : Si l’embryon nage avant le début de l’expérience, remplacez-le par un autre, car la recapture et le positionnement de l’embryon peuvent entraîner une désensibilisation au stimulus et des réponses répétées peuvent favoriser la faiblesse musculaire dans certains modèles de maladie.
   5. Commencez l’enregistrement en cliquant sur le bouton « enregistrer » et délivrez le stimulus mécanosensoriel à l’embryon en le touchant doucement avec une aiguille émoussée sur le dessus de la tête.
   6. Arrêtez l’enregistrement une fois que l’embryon a nagé hors du champ de vision ou qu’il est retourné au repos.
      REMARQUE : L’accélération culmine dans les 0,2 premières secondes de la réponse d’évacuation en rafale après le stimulus mécanique. Par conséquent, assurez-vous qu’au moins pendant les 0,2 premières secondes de l’enregistrement de l’intervention d’évacuation, le poisson est dans le champ de vision. À l’aide du logiciel Stream Pix 5, les données seront automatiquement enregistrées sous forme de fichier vidéo .avi. D’autres logiciels de capture vidéo tels que Free Video Capture ou Softonic, tous deux disponibles gratuitement en téléchargement, peuvent également être utilisés.
   7. Remettez l’embryon dans une nouvelle boîte de Pétri et sélectionnez un autre embryon pour l’analyse. Effectuer des tests sur un minimum de 15 poissons.

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Boîtes de Pétri de 90 mm	Produits de laboratoire du Pacifique	Réf. S90001
Pince à épiler, style 8	ProSciTech	Réf. T04-821
incubateur	Thermoline Scientific	TEI-43L
Caméra haute vitesse	Baumer	HXC20
StreamPix5	NorPix		Étape 1.2.3
Unité de contrôle de la température	point de vue
http://www.randomization.com	n/a		Étapes 1.1.2