Test de préférence lumière-obscurité : une méthode pour étudier le comportement lié à l’anxiété chez le poisson-zèbre

Résumé

Source : Holcombe, A., et al. Une nouvelle méthode d’administration de médicaments à plusieurs poissons-zèbres (Danio rerio) et la quantification du retrait. J. Vis. Exp.(2014)

La vidéo décrit le test de préférence clair-noir pour étudier le comportement lié à l’anxiété chez le poisson zèbre après l’exposition à l’éthanol.

Protocole

1. Tests comportementaux

1. Obtenez un manège clair/foncé de 9,5 cm de large sur 55 cm de long et 9,5 cm de profondeur avec un sol blanc imperméable (figure 1B). Fixez du papier imperméable non réfléchissant blanc et noir sur les parois intérieures de l’arène à l’aide de velcro, avec la moitié de l’arène recouverte de blanc et l’autre moitié recouverte de noir. Remplissez l’arène jusqu’à une profondeur de 5 cm avec de l’eau d’habitat à une température de 25 à 28 °C. Maintenez cette température tout au long de l’essai.
2. Minimisez les stimuli visuels externes en construisant une enceinte blanche à trois côtés pour l’emplacement de l’aréna. Assurez-vous que la zone d’essai dispose d’un éclairage zénithal diffus qui ne provoque pas de reflets à la surface de l’eau, mais qui est suffisamment lumineux pour le logiciel de suivi des mouvements ou la quantification manuelle post-hoc à partir d’images vidéo.
3. Placez l’arène dans l’enceinte et définissez les paramètres d’enregistrement et d’analyse des mouvements du logiciel de suivi du comportement. Réglez la durée de l’essai sur 5-15 min, en fonction de la question de recherche.
   NOTE : Ici, nous avons utilisé 5 min.
4. Transportez le groupe de poissons à tester dans la zone de recherche dans l’aquarium d’habitat et placez-les à l’extérieur de l’enceinte de l’aréna. Acclimater le poisson pendant 10 min.
5. Pêchez délicatement un poisson du groupe approprié et placez-le au centre de l’arène claire/sombre, en vous assurant de relâcher le poisson lorsqu’il est positionné parallèlement à l’axe long de l’arène pour éviter de biaiser le poisson vers la zone claire ou sombre.
6. Commencez à enregistrer le comportement immédiatement après que l’animal est relâché. Surveillez tout problème logiciel avec le suivi du poisson ou pour le saut ou la congélation du poisson. Faites pivoter l’arène de 180° après que la moitié des sujets ont été testés pour éviter toute confusion due à des biais résultant de l’extrémité de l’arène orientée vers l’extrémité ouverte de l’enceinte.
7. Une fois l’essai terminé, pêchez doucement au filet et retirez le poisson de l’arène dans un réservoir de rétention ou un réservoir d’habitat.

2. Analyse

1. Examinez le temps passé dans les zones claires par rapport aux zones sombres. Pour chaque groupe et chaque poisson, obtenir le temps relatif passé dans les zones claires et sombres et analyser à l’aide d’un test t d’un échantillon (ou d’un test de rang signé de Wilcoxon pour les données non paramétriques ; différence par rapport à (la moitié du temps total de l’essai) de 150 secondes) pour déterminer si les groupes préfèrent significativement une zone à l’autre.
2. Pour comparer les préférences, calculez un indice de préférence en soustrayant le temps passé dans la zone claire du temps passé dans la zone sombre et comparez les différences entre les groupes. Les tests t peuvent être utilisés pour comparer deux groupes. Comparez plusieurs groupes à l’aide d’une analyse de variance à un facteur en utilisant le test HSD post hoc de Tukey si nécessaire (ou le test de Kruskal-Wallis avec le test post hoc de comparaison multiple de Dunn pour les données non paramétriques).
3. Comparez la vitesse, le nombre de transitions de zone, les méandres et l’immobilité entre les groupes. Utilisez l’analyse de variance à un facteur en utilisant le test HSD post hoc de Tukey si nécessaire (ou le test de Kruskal-Wallis avec le test post hoc de comparaison multiple de Dunn pour les données non paramétriques).

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Arène Lumière/Ténèbres	coutume		Construction selon la description de la procédure. 9,5 cm de large, 9,5 cm de profondeur, 55 cm de long.
Système de boîtier de paillasse à trois étagères	Habitats aquatiques	n/a
Réservoir de frai de 1,5 L avec déflecteur de 400 μm	Habitats aquatiques	n/a
Ethovision XT Logiciel de suivi de mouvement	Technologie de l’information Noldus
Éthanol de grain pur	Luxco, INC	n/a