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1.Réponse optocinétique (OKR)
- Construisez l’appareil d’enregistrement OKR personnalisé à l’aide d’un tambour rotatif de 14,5 cm de diamètre, d’un stéréomicroscope avec des réglages d’intensité lumineuse réglables (300-8 000 lux) et d’un ordinateur (Figure 1A).
- Fixez au microscope une caméra qui fournira un flux en direct sur un moniteur adjacent et permettra la capture et l’enregistrement d’images.
- Contrôlez le tambour rotatif à l’aide d’un microcontrôleur relié à un ordinateur qui s’adaptera à diverses sélections de vitesse et de direction.
- Anesthésie le poisson dans de la tricaïne à 0,016 % pendant 2-3 minutes, puis place le poisson sur une petite plate-forme avec les yeux et les branchies suspendus sur le bord.
- Placez une fine éponge/serviette sur le corps du poisson et épinglez 2-3 morceaux de mousse, façonnés pour accueillir le poisson, sur le poisson pour le maintenir immobilisé. Limiter le mouvement de la queue du poisson s’est avéré être un aspect crucial pour l’immobilisation sans causer de blessure au poisson, et a été mieux réalisé en utilisant un morceau de mousse plat. (Figure 1B)
- Placez le poisson dans un réservoir cylindrique rempli d’eau, qui s’insère dans le tambour rotatif de l’appareil d’enregistrement OKR. À l’aide d’aimants sur la plate-forme pour positionner le poisson à la verticale, avec les yeux à environ 7,3 cm du bord du tambour. Le poisson devrait se remettre de l’anesthésie en quelques minutes - la respiration normale reprendra et des mouvements oculaires aléatoires doivent être observés.
- Placez un réseau de base de 0,07 cycle par degré (cpd) dans le tambour rotatif et engagez les commandes de l’ordinateur pour commencer la rotation et la capture vidéo (une vitesse de 12 tours par minute a été utilisée pour ce papier, mais des vitesses de 8 à 16 tours devraient donner des résultats similaires).
- Une fois qu’un OKR initial est provoqué par le réseau de base, interrompez brièvement la rotation et remplacez le réseau par un réseau plus petit (fréquence spatiale plus élevée).
- Répétez ce processus jusqu’à ce qu’il ne soit plus possible d’obtenir un OKR. Retestez avec le plus petit réseau qui a provoqué un OKR à la suite d’une approche d’escalier modifiée, puis répétez en utilisant le réseau qui n’a pas réussi à susciter une réponse pour vérifier la perte de l’OKR. Ce processus peut être répété pour vérifier une véritable réponse au plus petit réseau détectable si le réseau final a changé par rapport au premier événement d’extinction.
- Obtenez des mesures d’acuité monoculaire en plaçant un occluseur en plastique noir sur les bandes adjacentes à l’œil opposé. Répétez la procédure ci-dessus (étapes 1.6-1.7).
- Obtenez l’acuité de l’œil opposé en repositionnant l’occluseur et en répétant à nouveau les étapes 1.6-1.7.
- Notez la distance entre chaque œil et les rayures pendant la procédure de test en utilisant la bande de mesure de référence sous l’aquarium afin que des mesures d’acuité précises puissent être calculées dans les étapes suivantes.
2. Calcul de l’acuité visuelle
- Obtenez l’acuité visuelle en calculant le cpd :
