Essai d’évitement et de thigmotaxie chez le poisson-zèbre : une méthode à haut débit pour examiner le comportement larvaire en réponse à un stimulus visuel aversif

Abstract

Source : Richendrfer, H., et al. Analyses comportementales automatisées à haut débit chez les larves de poisson-zèbre. J. Vis. Exp.(2013)

La vidéo décrit l’évitement et le dosage de la thigmotaxie des larves de poisson-zèbre. La vidéo examine le comportement des larves de poisson-zèbre en réponse à un stimulus visuel aversif.

Protocol

1. Capture d’image

1. Jusqu’à 20 larves peuvent être placées dans chaque allée des plaques. En général, 5 larves par couloir sont utilisées pour faciliter le suivi le plus précis de la vitesse de nage et pour réduire le nombre de larves nécessaires par expérience. Les couloirs peuvent être remplis d’eau d’œuf avec ou sans produits pharmaceutiques ou toxiques selon l’expérience. Cependant, les voies ne doivent pas être remplies complètement avant d’être placées dans les armoires d’imagerie ; Cela évitera le débordement. Pour plus de cohérence, les larves doivent avoir une période d’acclimatation de dix minutes après avoir été placées dans les moules d’agarose et positionnées sur l’écran de l’ordinateur portable. Le déplacement efficace des larves de la boîte de Pétri vers la voie de l’agarose aidera à réduire le stress des larves. C’est plus facile lorsque les larves sont logées dans des bassins peu profonds ou des boîtes de Pétri.
2. Les armoires d’imagerie comprennent un appareil photo numérique Canon utilisé pour la photographie en accéléré et un ordinateur portable. L’appareil photo doit être placé en haut de l’armoire et dirigé vers le bas de l’armoire, où un ordinateur portable à écran de 15,6 pouces doit être placé avec l’écran vers le haut (Figure 1). Quatre plaques doivent être positionnées à la main directement sur l’écran de l’ordinateur portable. À ce moment, les voies peuvent être complétées avec de l’eau d’œuf ou un traitement chimique afin qu’elles soient au niveau du haut de la voie (pour éliminer les ombres sur les bords des voies dans les images).
3. Une présentation PowerPoint est utilisée comme stimulus aversif pour les larves. Dans le passé, des boules rouges en mouvement ont été montrées à des larves de poisson-zèbre dans 6 ou 12 plaques multi-puits. Le PowerPoint actuel commence avec un arrière-plan blanc vide pendant 15 minutes, suivi d’une barre rouge mobile sur la moitié supérieure de l’assiette pendant 15 minutes (Figure 2). Afin d’éviter la surchauffe des larves, il est préférable d’acheter un ordinateur portable dont la température d’écran ne dépasse pas 28 °C. Pour éviter l’évaporation du liquide à l’intérieur des voies d’agarose, le temps maximal d’imagerie doit être maintenu à moins d’une heure.
4. L’appareil photo numérique doit être programmé pour la photographie en accéléré, en prenant des photos toutes les 6 secondes pour un total de 300 images par expérience. Cependant, la fréquence et la durée peuvent être ajustées en fonction de l’expérience et de la quantification comportementale. Dans le passé, des temps d’imagerie prolongés étaient utilisés en utilisant des intervalles plus longs entre chaque image. La caméra peut être réglée à une résolution inférieure pour l’imagerie à la vitesse de la vidéo (30 images par seconde). Bien que la résolution inférieure limite les enregistrements à une seule plaque multipuits, les enregistrements vidéo conviennent à l’imagerie d’événements de nage rapide.

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Armoires d’imagerie	Tours WoodCraft
Agarose	pêcheur	Réf. BP1356-100
appareil photo numérique	Canon EOS	Rebelle T1i
Ordinateurs portables	Acer Aspire		N’importe quel est bon tant qu’il a un diamètre de 15,6 po. Écran LCD avec une résolution de 1366 x 768 pixels et une luminosité de 220 cd/m2.
Plaques à un puits	pêcheur	Tél. : 12-565-493
PowerPoint 2010	Microsoft
Diffuseur en plastique	Pendaflex	Référence 52345