Nouveau test de plongée en bassin : une méthode pour étudier les réponses au stress inné chez le poisson-zèbre

Résumé

Source : Chin J.S.R., et al. Approches comportementales pour étudier le stress inné chez le poisson zèbre. J. Vis. Exp. (2019)

L’article décrit une méthode comportementale pour évaluer le stress chez le poisson zèbre. En réponse au stress, le poisson-zèbre a tendance à nager au fond d’un aquarium jusqu’à ce que le stress soit éliminé. L’exemple de protocole décrit la méthode par étapes pour effectuer le test.

Protocole

1. Nouvelle configuration d’essai en réservoir

1. Préparez un bécher de 250 ml prérempli d’eau du système de gestion des poissons et d’au moins deux réservoirs de rétention.
2. Le matin de l’essai, transférez au moins 10 poissons-zèbres adultes d’essai à utiliser pour chaque condition expérimentale (témoins et adultes expérimentaux) de l’installation piscicole dans un réservoir de rétention, transférez-les dans la salle comportementale et laissez-les s’acclimater pendant au moins une heure.
   note: Une analyse de puissance doit être effectuée avant l’expérimentation, mais entre nos mains, un n = 10 est généralement suffisant pour détecter une signification statistique. De plus, le réservoir de rétention ne doit pas contenir plus de cinq personnes par litre d’eau. Une acclimatation d’une heure est suffisante, car il a été démontré que les adultes de poisson-zèbre s’habituent dans les 30 minutes suivant un nouvel aquarium. De plus, les rythmes comportementaux sont affectés par les processus circadiens, et donc les répétitions expérimentales effectuées à des jours différents doivent être effectuées dans les mêmes heures. Nous effectuons généralement toutes les expériences entre 11h00 et 18h00.
3. Étiquetez les aquariums de manière à ce que l’état ou le génotype des animaux ne soit pas visible par l’expérimentateur.
   note: Les expériences peuvent facilement être mises à l'aveugle de l'expérimentateur en étiquetant les réservoirs à l'aide d'un système de lettres ou de chiffres (c'est-à-dire qu'un réservoir est étiqueté « A », un autre « B », etc.). Une partie qui n’est pas impliquée dans les expériences étiquette les réservoirs avec un tel système et masque les identités de l’expérimentateur jusqu’à ce que la post-analyse soit terminée.
4. À l’aide d’un filet, placez délicatement un seul adulte dans le bécher prérempli de l’étape 1.1. Laissez les poissons adultes s’acclimater dans le bécher pendant 10 minutes.
   note: Notez le sexe de l’adulte, car il peut être important après l’analyse de rechercher des différences spécifiques au sexe.
5. Après s’être acclimaté dans le bécher, introduisez le poisson dans le nouvel aquarium (voir les détails ci-dessous) en versant doucement l’eau et l’adulte du bécher.
   note: Les étapes de cette section décrivent la mise en place du nouveau test en réservoir. Un schéma du produit final est présenté à la figure 1B.
   1. Placez le nouveau réservoir au milieu de la table.
   2. Positionnez les lumières infrarouges derrière le réservoir et placez la feuille acrylique blanche ou l’écran diffuseur entre le réservoir et la source lumineuse LED.
   3. Placez le diffuseur de manière à ce qu’il diffuse au maximum la lumière provenant des LED, et l’intensité de la lumière soit suffisante pour éclairer le nouveau réservoir. Plus la planche est proche de la source lumineuse, plus les lumières seront brillantes, mais moins elles se diffuseront. En revanche, placer le panneau diffuseur loin de la source lumineuse réduira l’intensité lumineuse, mais diffusera mieux la lumière.
   4. Remplissez environ les trois quarts du nouveau réservoir avec de l’eau du système de poissons.
      note: L’eau du système est générée par osmose inverse de l’eau du robinet, suivie d’un dosage tel que la conductivité soit égale à 900 ± 100 μS, que le pH soit neutre (7,2) et que la température soit de 27 ± 1 °C.
   5. Fixez l’appareil photo au support de l’appareil photo et connectez l’appareil photo à l’ordinateur. Ouvrez le logiciel d’acquisition vidéo et ajustez la caméra pour qu’elle fasse face à l’avant du char et assurez-vous que l’ensemble du nouveau char peut être vu et qu’il n’y a pas de zones obscurcies dans la vidéo. Ajustez le réservoir et les lumières infrarouges de manière à ce qu’il y ait un éclairage suffisant et uniforme dans tout le réservoir lorsqu’il est observé à travers la caméra.
      note: Avant de procéder à des expériences, il peut souvent être utile d’effectuer un essai, au cours duquel une vidéo d’un poisson est capturée et un suivi est effectué. Cela garantira que la configuration est suffisante pour l’expérimentation du comportement.
6. Après avoir introduit l’adulte dans le nouvel aquarium, démarrez l’enregistrement de la caméra et éloignez-vous de la configuration pour éviter une détresse supplémentaire aux poissons.
7. Une fois l’enregistrement terminé, retirer la personne du nouveau réservoir et la placer dans un nouveau réservoir de rétention.
   note: Un réservoir de rétention différent de celui de l’étape 1.2 devrait être utilisé pour éviter des essais répétés sur les mêmes individus.

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
caméra			Nous utilisons une caméra USB Point Grey Grasshopper3 avec objectif d’Edmund Optics.
Filtre infrarouge	Edmund Optics
Programme d’acquisition vidéo			Utilisez des programmes tels que Virtualdub ou FlyCapture car la fréquence d’images d’acquisition peut être définie.
Lumières LED infrarouges
Réservoir d’essai	Aquaneering	Référence ZT180	Taille : M3 1,8 litre
Support et pince, ou trépied standard pour appareil photo
Bécher de 250mL
Logiciel de suivi			Nous utilisons Ethovision XT 13 de Noldus Information Technology