Électrophysiologie du poisson-zèbre adulte : une méthode pour mesurer l’activité électrique extracellulaire des neurones in vivo

Résumé

Source : Johnston, L., et al. Enregistrement électrophysiologique dans le cerveau d’un poisson-zèbre adulte intact. J. Vis. Exp. (2013)

Le protocole décrit la procédure d’électrophysiologie chez le poisson-zèbre adulte. Cette méthode peut être utilisée pour mesurer l’activité neuronale in vivo.

Protocole

1. Électrophysiologie

1. Fermez le robinet d’arrêt d’intubation et déconnectez rapidement le Luer lock reliant la base d’intubation à la goutte à goutte de tricaïne.
   1. Déplacez le dispositif d’intubation intact vers le microscope d’électrophysiologie et connectez-le au système de perfusion.
   2. Ouvrez l’eau de l’habitat et perfusez-la à un débit de 1 ml/min pendant ~1 heure, afin de laver la tricaïne.
2. À l'aide d'un micromanipulateur sous contrôle visuel, positionnez l'électrode secondaire de manière à ce que la pointe de l'électrode puisse être insérée dans la narine de l'animal ou dans le creux derrière la mâchoire supérieure.
3. Insérez l’aiguille de l’électrode primaire dans l’ouverture de la craniotomie. Insérez l’aiguille dans le tissu, de sorte que la pointe soit positionnée assez superficiellement dans le tectum optique.
   1. Si l’électrode est trop profonde, le signal électrique peut être faible.
4. Collecter et analyser la différence électrique enregistrée entre les électrodes de référence primaire et secondaire. Ce processus permettra d’obtenir des enregistrements extracellulaires.
   1. Collectez les données en mode sans espace à une fréquence d’échantillonnage de 5 kHz, avec un filtre passe-bas de 0,1 kHz et un filtre passe-haut de 1 Hz.
   2. Ne commencez pas à consigner l’activité électrophysiologique avant que l’eau de l’habitat n’ait perfusé pendant au moins 45 minutes.
   3. Enregistrer une base d’activité native pendant au moins 15 minutes avant l’ajout de médicaments expérimentaux. Commencer la perfusion avec les médicaments expérimentaux de votre choix et consigner pendant la durée souhaitée. Dans les préparations saines, il est possible d’enregistrer l’activité neurologique pendant 2-3 heures.

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Habitat eau			pH 7,0-7,4, conductivité de 400-450 μS ; entretenu par Instant Ocean et Bicarbonate de sodium
0,4 % de tricaïne tamponnée au tris	Sigma-Aldrich	E10521	pH 7,2-7,4 ; stocké à -20 oC
Tubes de seringue Luer lock de 60 ml	Becton, Dickinson et compagnie	309653
Robinets d’arrêt à 3 voies avec raccords Luer
0,010 po Fil d’argent	A-M Systems, Inc.
Porte-électrode de la série Q
Fisherbrand Boîte de Pétri 100 mm x 15 mm	Fisher Scientific	NC9299146
34 G Aiguille biseautée	World Precision Instruments, Inc.	NF34BV
37 cm x 42 cm Kimwip	Kimberly-Clark Professionnelle	TW31KEM
Tube de 1/8 po de diamètre
Tube de 1 mm de diamètre
Microscope (Leica MZ APO)	Un autre microscope peut être utilisé