Injection intramusculaire (IM) : administration d’un composé dans le muscle dorsal d’un poisson zèbre adulte

Résumé

Source : Myllymäki, H., et al. Immunisation du poisson-zèbre adulte pour le dépistage préclinique des vaccins à base d’ADN. J. Vis. Exp. (2018).

Cette vidéo décrit la technique d’injection intramusculaire pour délivrer des composés dans les muscles dorsaux d’un poisson-zèbre adulte.

Protocole

1. Injection du vaccin à ADN et électroporation

1. Pour les vaccinations selon ce protocole, utilisez des poissons-zèbres adultes en bonne santé, âgés de 6 à 12 mois. Gardez les poissons dans un système à circulation continue avec un cycle lumière/obscurité de 14/10 h, avec un maximum de sept poissons par 1 L d’eau.
2. Préparez une solution d’ester éthylique (tricaïne) d’acide 3-aminobenzoïque à 0,02 % (pH 7) dans l’eau du réservoir pour anesthésier le poisson. Utilisez une boîte de Pétri de 10 cm ou quelque chose de similaire.
3. Préparez un réservoir de récupération en remplissant un bécher de 5 L avec 3 L d’eau propre du système.
4. Préparez un rembourrage de vaccination pour maintenir le poisson dans une position fixe pendant la vaccination. Prenez un^{morceau de 5} x 7 cm 2 d’une éponge de 2 à 3 cm d’épaisseur. Découpez une rainure dans l’éponge à l’aide d’une lame de scalpel ou de ciseaux tranchants.
   note: Le même rembourrage vaccinal peut être utilisé dans plusieurs expériences. Désinfectez l’éponge entre les expériences en la trempant dans de l’alcool éthylique à 70 % et laissez sécher.
5. Trempez soigneusement l’éponge dans l’eau du système et placez-la sur une boîte de Pétri.
6. Jeûnez le poisson 24 h avant les vaccinations.
7. Anesthésie un poisson-zèbre en le plaçant sur une boîte de Pétri contenant 0,02 % de tricaïne. Attendez que le poisson ne réponde pas à la stimulation tactile et qu’il n’y ait plus de mouvement des branchies. Anesthésie un seul poisson à la fois.
8. À l’aide d’une cuillère en plastique, transférez le poisson-zèbre anesthésié sur l’éponge humide et placez le côté ventral du poisson vers le bas dans la rainure. Dans la bonne position, assurez-vous que la tête et la majeure partie du corps du poisson sont à l’intérieur de la rainure et que la nageoire dorsale et la queue dépassent de la rainure.
9. Au microscope, placez soigneusement l’aiguille dans un angle d’environ 45° près du muscle dorsal du poisson-zèbre, à l’aide des molettes de réglage fin des axes x et y du micromanipulateur.
10. Trouvez le petit endroit sans écailles devant la nageoire dorsale, où la poussée de l’aiguille ne demande pas de force. Si une résistance se fait sentir, essayez un endroit adjacent. Évitez de blesser la colonne vertébrale, la nageoire dorsale ou les écailles.
    note: Si l’aiguille se plie en poussant, raccourcissez légèrement l’aiguille en la coupant.
11. Utilisez l’interrupteur au pied pour injecter progressivement la solution vaccinale dans le muscle. Observez l’injection au microscope : le rouge de phénol est visible lorsqu’il pénètre dans le tissu musculaire. Ajustez la durée de l’impulsion si nécessaire.
    note: Vous pouvez également utiliser le bouton initiateur d’impulsions situé sur le panneau avant de la pompe pneumatique pour l’injection. Cependant, l’utilisation d’une pédale à distance permet d’utiliser l’autre main pour régler la longueur de l’impulsion par la molette de cadran à 10 tours. Évitez d’injecter la solution trop rapidement, car cela pourrait causer des lésions tissulaires excessives. Assurez-vous de ne pas injecter d’air.
12. Électroporez le poisson immédiatement après l’injection. Assurez-vous que le poisson est toujours sous anesthésie. Gardez le poisson sur l’éponge et placez-le entre des électrodes de type pince à épiler, de sorte que les électrodes soient situées de chaque côté du site d’injection. N’appuyez pas trop fort sur la pince à électrodes mais gardez les deux électrodes en contact avec le poisson.
    1. Appuyez sur le bouton de démarrage de l’électroporateur pour donner six impulsions de 40 V, 50 ms.
    2. Transférez délicatement les poissons dans le réservoir de récupération.
    3. Nettoyez les électrodes après chaque électroporation en les frottant avec de l’éthanol à 70 %.
       note: Surveillez attentivement le bien-être des poissons après la vaccination. Euthanasier tout poisson montrant des signes d’inconfort (récupération lente de l’anesthésie, nage aberrante, halètement) avec 0,04 % de tricaïne. Après la récupération, transférez le poisson dans l’unité de circulation et nourrissez-le normalement.

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Sel de sodium rouge de phénol	Sigma-Aldrich	Référence 114537-5G
Tricaïne (3-aminobenzoate d’éthyle, sel de méthanesulfonate)	sigma	A5040-100g	Solution d’anestésie et d’euthanasie
Pince à épiler Électrodes (7 mm) Kits	Appareil BTX Harvard	BTX 450165	électrodes de type pince à épiler
Capillaires en aluminosilicate	Appareil de Harvard	Référence 30-0108
Micromanipulateur	Narishige	MA-153
microscope	Olympe	ZS61
ECM Electro Carré Porator	Appareil BTX Harvard	BTX ECM 830
Cuillère en plastique
éponge
Établi en polystyrène