Xénogreffe dérivée d’un patient de poisson-zèbre (zPDX) : un modèle de cancer

Résumé

Source : Wang L. et. al., Modèle de xénogreffe hétérogène dérivé du patient du cancer du pancréas utilisant des larves de poisson-zèbre comme hôtes pour l’évaluation comparative des médicaments. J. Vis. Exp. (2019).

Cette vidéo décrit la technique de création d’un modèle de xénogreffe dérivé d’un patient poisson-zèbre. Dans le protocole d’échantillon, nous évaluons l’efficacité des médicaments Gemcitabine et Navitoclax sur le modèle de xénogreffe de tumeur pancréatique.

Protocole

1. Injection d’une suspension à cellules mixtes dans le poisson-zèbre

1. Ajouter une solution de tricaïne 10x dans de l’eau E3 pour anesthésier les larves de poisson-zèbre et transférer les larves (à partir de l’étape 2.3) dans la plaque d’injection remplie d’E3 modifié (E3 avec 1 g/L de glucose et 5 mmol/L de L-glutamine).
2. Verser 25 μL de suspension à cellules mixtes dans l’aiguille des microcapillaires et insérer l’aiguille dans le manipulateur de micro-injection.
3. Réglez la pression et le temps d’injection. Injectez 50 à 80 cellules (~8 nL) dans le sac vitellin du poisson-zèbre à 48 hpf.

2. Culture du poisson-zèbre xénogreffé (modèle zPDX)

1. Transvaser les larves de poisson-zèbre post-xénogreffées dans 40 mL de solution mixte (solution E3 avec 1 g/L de glucose et 5 mmol/L de L-glutamine) à 32 °C.

3. Administration de médicaments sur le poisson-zèbre xénogreffé et évaluation de la viabilité des cellules tumorales/fibroblastes

1. Détermination de la concentration optimale de gemcitabine/navitoclax.
   1. Placez 10 embryons de poisson-zèbre de type sauvage à 48 hpf dans chaque puits d’une plaque de 12 puits.
   2. Ajouter différentes concentrations de gemcitabine ou de navitoclax dans chaque puits et incuber à 32 °C pendant deux jours.
   3. Après 2 jours, calculez la dose de tolérance maximale (DMT) de gemcitabine et de navitoclax à laquelle les larves de poisson-zèbre ne présentent pas de malformation significative et de comportement anormal, et les concentrations de travail sont fixées en dessous de la DMT.
2. Traitement des modèles zPDX avec de la gemcitabine/navitoclax.
   1. Placez 10 larves xénogreffées dans chaque puits d’une plaque de 12 puits.
   2. Divisez les larves en quatre groupes, traitez le groupe témoin avec de l’E3 contenant 0,1 % de DMSO, et traitez les autres groupes avec 5 μg/mL de gemcitabine et/ou 50 μM de navitoclax, et incubez à 32 °C pendant deux jours.
3. Évaluation de la viabilité cellulaire et de la composition cellulaire dans des modèles zPDX.
   1. Anesthésier les larves xénogreffées après le traitement et les placer dans de la méthylcellulose à 3 %.
   2. Mage des larves depuis la vue latérale à l’aide d’un microscope à fluorescence ou d’un microscope confocal.
   3. Quantifiez l’intensité des signaux de fluorescence rouge et vert à l’aide des logiciels ImageJ et GraphPad.

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
L-glutamine	GIBCO	21051024
Gemcitabine	Gemzan
Méthylcellulose	sigma	Référence M0262
Navitoclax(ABT-263)	Selleck	S1001	Inhibiteur de Bcl-xL
équipement
Micro-injecteur	NARISHIGE
Microscope confocal	LEICA	SP8	0,00