Dissection intestinale de poisson-zèbre adulte : une technique pour analyser l’absorption des composés

Résumé

Source : Jie J. et. al., Intubation orale de poisson-zèbre adulte : un modèle d’évaluation de l’absorption intestinale de composés bioactifs. J. Vis. Exp. (2018).

Cette vidéo décrit la technique d’isolement de l’intestin pour évaluer l’absorption intestinale de composés bioactifs. Dans cet échantillon, nous isolerons l’intestin d’un poisson-zèbre adulte afin d’analyser l’absorption d’immunostimulants.

Protocole

1. Dissection intestinale du poisson-zèbre

1. Après une période de temps précise après l’intubation (p. ex., 5 h et/ou 24 h), placez le poisson à l’aide d’un filet dans une solution de méthanesulfonate de 3-aminobenzoate d’éthyle (MS-222) à 300 mg/L pour l’euthanasie. Assurez-vous que l’opercule cesse de bouger et qu’il n’y a pas de réflexe de pincement de la queue. Cinq minutes suffisent normalement.
2. Ramassez l’animal euthanasié à l’aide d’une moustiquaire et placez-le sur un papier filtre.
   note: Le papier filtre est très utile pour enlever le tissu adhésif le long de l’intestin.
3. À l’aide de ciseaux de dissection tranchants, faites une incision semi-circulaire de l’anus à l’opercule et ouvrez l’incision à l’aide d’une pince à épiler fine. Coupez les deux extrémités de l’intestin, retirez tous les organes internes et placez-les sur le papier filtre.
   prudence: Agir rapidement pour réduire le métabolisme cellulaire et la mort.
   note: Vous pouvez également retirer le tissu adhésif dans du PBS et sur de la glace.
4. Séparez l’intestin des organes internes en veillant à garder son orientation (segment intestinal antérieur à postérieur) et étirez-le. Habituellement, le segment antérieur de l’intestin est plus large que le segment postérieur. Prenez soin de prélever tout l’intestin lors de la dissection.
   note: L’extrémité postérieure est assez fine et fragile chez les petits poissons et peut se détacher, en particulier chez les animaux <0,7 g.
5. Roulez l’intestin sur le papier filtre à l’aide d’une pince à épiler afin de détacher le tissu adhésif de l’intestin.
6. Procéder à la préparation de l’intestin pour diverses analyses en aval

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
MS-222	Sigma Aldrich	E10521	poudre
10 fois par PBS	Sigma Aldrich	Réf. P5493
Papier filtre	Laboratoire de filtres	RM14034252