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1. Mesure du poisson et dissection
- Placez le poisson dans une boîte de Pétri à moitié remplie de PBS frais et posez-le sur son côté droit.
- Mesurer la longueur du poisson, du museau à la base de la queue (pédoncule caudal), à l’exclusion des nageoires caudales, à l’aide d’un pied à coulisse numérique en mm (figure 1). Il s’agit de la longueur standard (SL).
- Chaque poisson peut se voir attribuer une combinaison de chiffres et de lettres pour permettre de suivre un poisson individuel et le cœur disséqué qui en résulte pour une analyse ultérieure. Les données, y compris le numéro de stock des parents, l’âge à la fixation, les mesures de la SL, ont été saisies dans une feuille de calcul et organisées en fonction de ces étiquettes.
- Avant la dissection, étiquetez les bandelettes de tubes PCR avec le numéro de suivi attribué et remplissez-les de PBT ou d’une autre solution appropriée pour une analyse plus approfondie.
- Orientez le poisson face ventrale vers le haut dans une boîte de Pétri tout en stabilisant le corps à l’aide d’une pince qui maintient la tête entre les yeux et les branchies (figure 1).
Poissons plus petits (moins de 12mm SL) :
- a) À l’aide d’une pince tranchante ou d’une micro-aiguille dans un porte-épingle, retirez les muscles pectoraux et les nageoires du corps pour révéler le cœur. Le mouvement constant de la pince pendant la dissection peut provoquer des courants dans le PBT qui déplacent le poisson. Ceci est particulièrement problématique pour les petits poissons, c’est pourquoi une micro-aiguille peut être utilisée pour enlever les muscles pectoraux et les nageoires et ouvrir la cavité corporelle.
- a) À l’aide de la pince, retirez doucement le cœur de la cavité sous l’oreillette. Alternativement, chez certains poissons, vous pourrez peut-être retirer le cœur en tirant doucement le bulbe vers l’extérieur et le reste du cœur suivra. Faites attention à l’emplacement de l’oreillette si vous utilisez cette technique car elle peut facilement être endommagée. S’il y a du tissu supplémentaire qui vient avec le cœur, c’est bien et peut être éliminé après.
- a) Si le poisson contient un marqueur cardiaque fluorescent tel que Tg(myl7 :GFP)twu34, utiliser une lunette fluorescente pour la dissection et vérifier l’ablation du cœur par fluorescence (figure 2).
- a) Une fois le cœur retiré de la cavité, utilisez la pince pour tenir le cœur et une micro-aiguille pour retirer le tissu non cardiaque supplémentaire et la muqueuse épicardique de l’extérieur du cœur.
Poissons plus gros (supérieur à 12mm LS) :
- b) À l’aide de micro-ciseaux à ressort, faites trois incisions de moins de 1 mm de profondeur : 1- coupe transversale à travers les branchies 2- coupe transversale à l’avant du ventre 3- coupe sagittale sur la face ventrale reliant les deux coupes (Figure 3).
- b) À l’aide d’une pince tranchante, retirez les muscles pectoraux et les nageoires du corps pour ouvrir la cavité corporelle et révéler le tissu argenté du péricarde (Figure 4A). Retirez ce tissu péricardique et le cœur deviendra visible (Figure 4B).
- b) Utilisez les micro-ciseaux pour couper l’artère reliée à l’artériose bulbeuse, située au-dessus du cœur. Une fois cette artère coupée, placez les pointes des pinces sous l’oreillette, utilisez les pinces pour retirer le cœur de la cavité. S’il y a du tissu supplémentaire qui vient avec le cœur, c’est bien et peut être enlevé plus tard.
- b) Une fois le cœur retiré de la cavité, utilisez les deux pinces pour tenir le cœur et retirer les tissus supplémentaires, ou une paire de pinces pour tenir les cœurs et une micro-aiguille pour retirer les tissus non cardiaques supplémentaires. La muqueuse épicardique, évidente par sa pigmentation noire, peut être retirée de l’extérieur du cœur si vous le souhaitez en grattant doucement les tissus.