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Décellularisation des coussinets adipeux mammaires : dérivation d’hydrogels de matrice extracellulaire à partir de coussinets adipeux mammaires

30 avril 2023

Dans cet article

Résumé

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Source : Alves et al., Étude des effets normaux des rayonnements tissulaires à l’aide d’hydrogels à matrice extracellulaire. J. Vis. Exp. (2019).

Cette vidéo décrit une technique de dérivation d’hydrogels de matrice extracellulaire par décellularisation de coussinets adipeux mammaires murins suite à une irradiation ex vivo pour des études in vitro. Cet hydrogel aide à imiter l’environnement du tissu mammaire in vivo après un traitement par radiothérapie pour étudier le comportement des cellules tumorales.

Protocole

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1. Décellularisation

REMARQUE : Cette procédure a été adaptée des méthodes précédemment publiées axées sur la décellularisation adipeuse, qui comprenaient le détergent ionique désoxycholate de sodium plutôt que le dodécylsulfate de sodium pour éliminer efficacement l’ADN.

  1. Le jour 1, retirez les coussinets de graisse mammaire congelés ou les MFP à -80 °C et décongelez-les à température ambiante.
  2. Une fois décongelés, séchez brièvement les MFP sur une lingette délicate. Pesez les MFP à l’aide d’une balance analytique.
  3. À l’aide d’une pince avec des ciseaux ou d’un scalpel....

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Déclarations de divulgation

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Aucun conflit d’intérêts n’a été déclaré.

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article
NomEntrepriseNuméro de catalogueCommentaires
10 % de formol tamponné neutre, cube avec robinet VWRRéférence 16004-128
2-méthylbutane Alfa Aesar19387
Albumine sérique bovine Sigma-AldrichA1933-25G
Solution saline tamponnée au phosphate de Dulbecco Gibco14040133
Fisher Healthcare Tissue-Plus Composé O.C.T. Fisher Scientific Tél. : 23-730-571MILIEU D’ENROBAGE DE CRYOSTAT
Kimtech Science Kimwipes Kimberly Clarklingettes de travail délicates
n-Propanol (sans peroxyde/séquençage), Fisher BioReagents Fisher ScientificBP1130-500
PBS (10X), pH 7,4 Qualité Biologique, Inc.Référence : 119-069-151 Saline tamponnée au phosphate
Pénicilline-streptomycine GibcoRéférence 15140-122
Acide peracétique Sigma-Aldrich 77240-100ML
Triton x-100 Sigma-Aldrich X100-100ML t-Octylphénoxypolyéthoxyéthanol
Trypsine-EDTA (0,25 %), rouge de phénol GibcoRéférence 25200-056
Richard-Allan Scientific Série Signature Hématoxyline 7211Richard-Allan ScientificRéférence 7211
Papier filtre qualitatif Whatman, 4e année Whatman N° 1004-110Papier filtre qualitatif de grade 4
Xylènes (certifiés ACS), Fisher Chemical Fisher ScientificX5-5

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Mots-clés

Protocole de d cellularisationtraitement la trypsine EDTAlyse au Triton X 100traitement l acide d soxycholiquerigidification l acide perac tiquetraitement au propane 1 oltapes de lavage des tissusm thode de conservation par cong lation

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