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1. Préparation des échantillons de tissus tumoraux
- Fixer le tissu tumoral dans du formol tamponné neutre (NBF) à 10 % dans une cassette.
note: Le tissu tumoral des tumeurs pulmonaires proximales est généralement obtenu par bronchoscopie, réalisée sous sédation modérée par un pneumologue ou un pneumologue. Pour les lésions périphériques et les maladies pulmonaires diffuses, une biopsie transbronchique ou à l’aiguille est indiquée. Ces procédures sont généralement effectuées dans une salle d’opération ou une unité de soins intensifs.
- Intégrez la cassette dans paraffin.
note: La fixation peut être réalisée par perfusion ou immersion immédiatement après la dissection, et nécessite généralement 8 à 10 h. Le volume fixateur doit être 15 à 20 fois plus élevé que le volume de l’échantillon. Il n’est pas recommandé de fixer le tissu de biopsie pendant plus de 10 h, car une fixation excessive peut provoquer un masquage de l’antigène. La vitesse de fixation est d’environ 1 mm/h à température ambiante.
- Infiltrez l’échantillon de tissu fixé avec de la cire dans le processeur de tissus (voir tableau des matériaux).
note: La déshydratation est effectuée en trois bains d’alcool avec des concentrations croissantes de 70 %, 85 % et 90 %. L’eau est finalement évacuée par trois derniers bains d’alcool absolus. Le nettoyage est effectué dans trois bains de toluène, et l’infiltration de la cire dans des bains de cire chaude (44-60 °C).
- Incorporez le tissu dans un moule rempli de paraffine fondue (voir Tableau des matériaux) et attendez la solidification.
- Sectionnez le tissu incrusté de paraffine à une épaisseur de 3 μm sur un microtome.
- Transférez le ruban de paraffine sur une lame de verre de microscope chargée positivement (voir le tableau des matériaux).
- Sécher la lame pendant 1 h à 37 °C.
Remarque : Conserver les coupes de tissu à une température de 2 à 8 °C (de préférence) ou à température ambiante jusqu’à 25 °C pour préserver l’antigénicité, et colorer dans les 15 jours suivant la section.
2. Préparation des échantillons de cytologie
- Prélever les lavages bronchiques dans une solution de préservation (voir le tableau des matériaux).
note: Pour cela, la technique standard de bronchoscopie est utilisée.
- Lavage de la distribution de la bronche à échantillonner. Récupérez le linge dans un récipient propre. Étiquetez le contenant avec le prénom et le nom du patient, sa date de naissance et la source de l’échantillon.
- Transférez les lavages bronchiques dans un tube conique de 50 ml et ajoutez 2 g de poudre de DL-Dithiothréitol (voir le tableau des matériaux), agitez le tube pendant 30 min, puis centrifugez-le à 250 x g pendant 5 min à température ambiante.
- Retirer le surnageant et ajouter 10 mL d’une solution mucolytique (voir le tableau des matières).
- Agiter l’échantillon pendant 20 min à vitesse moyenne (niveau 9) et le centrifuger à 250 x g pendant 5 min à température ambiante.
- Retirez le surnageant et déposez la pastille cellulaire dans des tubes de collecte contenant 10 % de FBN.
- Ajoutez 4 gouttes d’un réactif de préparation de bloc cellulaire (voir Tableau des matériaux) à la pastille cellulaire.
- Transférez la pastille cellulaire dans une cassette, fixez-la dans 10 % de NBF et incorporez-la à la paraffine pour la préparation et la section du bloc cellulaire (voir étapes 1.1 à 1.7).