Dosage de la xénogreffe de poisson-zèbre : une méthode pour évaluer l’efficacité anticancéreuse des produits thérapeutiques sur la tumorigénicité chez le poisson-zèbre in vivo

Résumé

Source : Lee, J. Y et al.,Évaluation préclinique de la bioactivité de la coumarine anticancéreuse OT48 par des sphéroïdes, des tests de formation de colonies et des xénogreffes de poisson-zèbre.J. Vis. Exp. (2018)

Cette vidéo décrit le test de xénogreffe de poisson-zèbre pour évaluer la formation de tumeurs in vivo et étudier l’effet des agents thérapeutiques.

Protocole

Toutes les procédures impliquant des modèles animaux ont été examinées par le comité institutionnel local de protection des animaux et le comité d’examen vétérinaire JoVE.

1. Essai de xénogreffe de poisson-zèbre

REMARQUE : Cette approche technique est visualisée sous forme de schéma (Figure 1).

1. Préparation des réactifs de base
   1. Préparez 1 L de solution 30x Danieau : 1740 mM de NaCl, 21 mM de KCl, 12 mM de MgSO₄•7H2O, 18 mM de Ca(NO₃)₂ et 150 mM d’HEPES. Ajustez le pH du tampon à 7,6 à l’aide d’un pH-mètre.

Résultats

Figure 1 : Schéma de principe du processus global du test de xénogreffe de poisson-zèbre.

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Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
A549	ATCC	CCL-185	37 °C°
RPMI 1640	Lonza	Référence 30096	4 °C°
FBS	Biowest	S1520-500	-20 C°
Pénicilline-streptomycine	Lonza	17-602E	-20 C°
Fiole de culture cellulaire T25	Spl	Référence 70025	Rt
Fiole de culture cellulaire T75	Spl	Référence 70075	Rt
Fiole de culture cellulaire T175	Spl	Référence 71175	Rt
Tube de 1,5 ml	Extragène	Tube-170-C	Rt
Plaque à 24 puits	Spl	Référence 30024	Rt
Pétridure	Spl	Référence 10100	Rt
La solution PBS	Hyclone	SH30256.02	Rt
Trypsine-EDTA	Gibco	Tél. : 25-300-054	4 °C°
chlorure de sodium	Sigma-Aldrich	Référence 71382	Rt
Chlorure de potassium (KCL)	Sigma-Aldrich	P9541	Rt
Sulfate de magnésium heptahydraté (MgSO4.7H2O)	Sigma-Aldrich	M2773	Rt
Nitrate de calcium tétrahydraté (Ca(NO3)2)	Sigma-Aldrich	Réf. C1396	Rt
La solution HEPES	Sigma-Aldrich	N° H0887	Rt
Méthanesulfonate d’éthyle 3-aminobenzoate (Tricaïne)	Sigma-Aldrich	E10521	Rt
Solution de rouge de phénol	Sigma-Aldrich	Réf. P0290	Rt
Méthylcellulose	Sigma-Aldrich	M0512	Rt
1-phényl-2-thiourée (PTU)	Sigma-Aldrich	Réf. P7629	Rt
Colorant CM-Dil	Invitrogen	Réf. C7001	-20 C°
Capillaire en verre	Instruments de précision mondiaux	TW 100F-4	Rt
Extracteur de micropipette	Instrument d’obturateur, États-Unis	P-97	Rt
Micro-injecteur	Instruments de précision mondiaux	PV820	Rt
seringue	KOVAX	1ml	Rt
Micro chargeur	Eppendorf	5242956003	Rt
Toboggan en verre	Marienfeld	Réf. HSU-1000612	Rt
Microscopie à fluorescence	Leica	DE/DM 5000B	Rt