Induction de la métaplasie acineuse à canalaire : une méthode pour étudier la différenciation d’une cellule acineuse à une cellule canalaire en culture 3D ex vivo

Résumé

Source : Fleming Martinez, A. K. et. al. Imiter et manipuler la métaplasie acineuse-canalaire pancréatique dans la culture cellulaire tridimensionnelle. J. Vis. Exp. (2019).

Cette vidéo décrit la technique de différenciation des cellules acineuses pancréatiques en cellules canalaires en culture 3D ex vivo. Cela permet de comprendre les mécanismes régulant la métaplasie acineuse-canalaire (MAA), un processus clé dans le développement précoce du cancer du pancréas.

Protocole

Toutes les procédures impliquant des modèles animaux ont été examinées par le comité institutionnel local de protection des animaux et le comité d’examen vétérinaire JoVE.

1. Préparation des matériaux, des solutions et des bases matricielles tridimensionnelles

1. Découpez des mailles en polypropylène de 500 μm et 105 μm en carrés de 76 mm par 76 mm. Pliez chaque carré en deux deux deux fois pour créer un carré plié plus petit. Placez un carré à mailles de 500 μm et un carré de 105 μm dans un sachet autoclave.
2. Carrés en maille de polypropylène autoclave, ainsi que deux paires de ciseaux et de pinces.
3. Prép....

Résultats

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Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Incubateur 5 % CO2, 37 °C	NUAIRE	NU-5500
Tubes de 50 ml	Faucon	Référence 352070
Bécher, 600 mL	Fisherbrand	Référence : FB-101-600
Adénovirus, Ad-GFP	Biolabs vectoriels	N° 1060
dexaméthasone	sigma	D1756	Créer une solution à 4 mg/ml en dissolvant la poudre dans du méthanol, en l’aliquote et en la stockant à -20 °C
Sérum fœtal bovin	sigma	F0926-100mL
forceps	Outils scientifiques fins	Référence 11002-12
Lame en verre, 8 puits	Lab-Tek	177402
Seau à glace, rectangulaire	Fisher Scientific	Référence 07-210-103
Matrigel	Corning	356234	Appelée « matrice de membrane basale » dans le manuscrit.
Pbs	Fisher Scientific	SH30028.02
Pénicilline-streptomycine	ThermoFisher Scientific	15140122
Plaque, 12 puits	Costar de Corning	Référence 3513
Plaque, plaque à 24 puits	Costar de Corning	Référence 3524
Plaque, 6 puits	Faucon	353046
Maille en polypropylène, 105 μm	Laboratoires Spectrum	146436
Maille en polypropylène, 500 μm	Laboratoires Spectrum	146418
ciseaux	Outils scientifiques fins	Référence 14568-12
Bicarbonate de sodium (poudre blanche fine)	Fisher Scientific	BP328-500
hydroxyde de sodium	Fisher Scientific	S318-500
Inhibiteur de la trypsine de soja	Gibco	17075029
Collagène de queue de rat de type I	Corning	354236
PIPETMAN Classic P10, 1-10 μl	Gilson	F144802
Pipettes, 5 ml	Faucon	357543
Pointes de pipette, 10 μl	Scientifique américain	Référence 1110-3700
Pointes de pipette, 1000 μl	Olympus Plastics	24-165RL
Pointes de pipette, 200 μl	Scientifique américain	Référence 1111-1700
Pipettes, 25 ml	Faucon	357525
Pipet-Aid	Drummond
Pipettes, 10 ml	Faucon	357551
PIPETMAN Classic P200, 20-200 μl	Gilson	F123601
PIPETMAN Classic P1000, 200-1000 μl	Gilson	F123602
PIPETMAN Classic P20, 2-20 μl	Gilson	F123600
Waymouth MB 752/1 Medium (poudre)	sigma	W1625-10X1L
Poids bateau, hexagonal, moyen	Fisherbrand	Référence 02-202-101