Modèle de souris orthotopique fluorescente : implantation de cellules cancéreuses exprimant la GFP dans une souris pour évaluer la progression tumorale in vivo

Résumé

Source : Moreno, J. A., et al. Modèle murin orthotopique fluorescent du cancer du pancréas. J. Vis. Exp.(2016)

Cette vidéo montre le protocole d’implantation orthotopique de cellules cancéreuses du pancréas exprimant des protéines fluorescentes vertes dans le pancréas de la souris. Le modèle murin orthotopique aide à étudier l’efficacité de nouvelles thérapies sur les tumeurs primaires et métastatiques.

Protocole

Toutes les procédures impliquant des modèles animaux ont été examinées par le comité institutionnel local de protection des animaux et le comité d’examen vétérinaire jolive.

1. Implantation chirurgicale

REMARQUE : Assurez-vous que tout le matériel et les instruments chirurgicaux sont stériles. Pratiquez des techniques aseptiques en tout temps.

1. Placez un coussin chauffant sur la table et couvrez d’un rideau stérile. Installez l'appareil d'anesthésie et assurez-vous que toutes les fournitures sont à portée de main.
2. Placez le museau de l'animal dans le masque d'anesthésie et réglez l'anesthésie à 1 L/min d'oxygène et 2,5 % d'isoflurane.
3. Frottez doucement le flanc de l’animal avec de l’iode et rincez avec de l’éthanol à 70 %. Répétez l’opération trois fois.
4. Confirmez que l’animal est complètement anesthésié en pinçant la patte arrière. L’animal est complètement anesthésié et prêt pour la chirurgie si aucune réponse n’est observée. Cependant, si l’animal tressaille, assurez-vous qu’il y a suffisamment d’anesthésie dans le vaporisateur et laissez à l’animal plus de temps pour passer complètement sous anesthésie.
5. Chargez environ 200 μl de suspension cellulaire dans une seringue TB de 1,0 ml avec une aiguille de 18 G (préalablement refroidie). Remplacez l’aiguille par une aiguille de 27 G et remettez-la dans la glace jusqu’au moment de l’utiliser.
6. Localisez la région générale de la rate (quadrant supérieur gauche de l’abdomen) et, à l’aide d’une pince, pincez la peau au-dessus de cette région. À l’aide de ciseaux chirurgicaux, faites une incision d’environ 1,0 cm pour créer une poche. De même, pincez le muscle lisse au-dessus de la rate et coupez afin d’accéder à la cavité péritonéale.
7. Saisissez doucement l’extrémité caudale de la rate et retirez-la du corps. Le pancréas sera attaché à la rate. Étalez le pancréas à l’aide d’un coton-tige stérile humide et localisez la queue du pancréas.
8. Injectez 50 μl dans la queue du pancréas, laissez l’aiguille à l’intérieur pendant 10 secondes et faites pivoter lentement l’aiguille hors du pancréas. Une implantation réussie ressemblera à une bulle superficielle sans aucune fuite.
9. Retournez le pancréas et la rate dans la cavité péritonéale. Enfermez d’abord le muscle, puis enfermez la peau séparément. Utilisez une suture ou une agrafe 6-0 pour fermer l’incision. Pour éviter la douleur chez l’animal, administrer le kétoprofène par voie sous-cutanée (5 mg/kg) pendant 24 heures. Alternativement, administrer de la buprénorphine sc (0,05 - 0,1 mg / kg) toutes les 12 heures sur une période de 36 heures.
10. Récupérez l’animal de l’anesthésie et remettez-le dans sa cage. Surveillez également la douleur. Les animaux doivent recevoir un soulagement de la douleur au moment de la chirurgie préventive (ou même avant). Un soulagement supplémentaire de la douleur doit être fourni aux animaux qui ressentent de la douleur conformément au protocole de l’IACCUC ou tel que prescrit par le vétérinaire traitant ou la personne désignée.

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Alcare ou Foamed Antiseptic Handrub	Steris	Référence 639680
Seringue TB 27 G 1/2	Becton Dickinson	Référence 305620
L’isoflurane	Blutler Schein	Référence 50562
Kétoprofène	Santé animale à Fort Dodge
Ciseaux chirurgicaux, 5,5" mayo droit	Henry Schein	22-1600
Lignée cellulaire PANC-1 GFP	Anticancer, Inc
Système d’imagerie pour petits animaux : iBox Scientia	UVP, LLC. Upland, Californie.		Système d’imagerie des petits animaux pour observer la tumeur fluorescente chez les animaux vivants
SutureVet PGA 6-0 PGA	Henry Schein	Référence 39010
Lignée cellulaire PANC-1 GFP	Anticancer, Inc
DPBS (solution saline tamponnée au phosphate de Dubelcco)	Thermo Ficher Sci	21300025