Imagerie chronique des souris cortex visuel en utilisant une préparation Diluée-crâne

Summary

Dans ce matériel vidéo et complémentaires, nous montrons un protocole pour les maladies chroniques In vivo du cerveau intact en utilisant une préparation amincie crâne.

Abstract

L'imagerie in vivo en utilisant microscopie à deux photons laser à balayage (2PLSM) permet l'étude des cellules vivantes et des processus neuronaux dans le cerveau intact. La technique présentée ici permet l'imagerie de la même zone du cerveau à différents moments (chronique d'imagerie) avec une résolution microscopique, permettant le suivi des épines dendritiques qui sont les petites structures qui représentent la majorité des sites de post-synaptiques excitateurs dans le SNC. La capacité à résoudre clairement fines structures corticales plus de points plusieurs fois a de nombreux avantages, en particulier dans l'étude de la plasticité du cerveau dans lequel les changements morphologiques au niveau des synapses et le remodelage du circuit peut aider à expliquer les mécanismes sous-jacents. Dans ce matériel vidéo et complémentaires, nous montrons un protocole pour l'imagerie in vivo chroniques du cerveau intactes en utilisant une préparation amincie crâne. La préparation éclaircis-crâne est une approche minimalement invasive, ce qui évite les dommages potentiels à la mère et / ou du cortex, réduisant ainsi le déclenchement d'une réponse inflammatoire. Lorsque ce protocole est réalisé correctement, il est possible de bien surveiller les changements dans les caractéristiques des épines dendritiques dans le cerveau intact sur une période de temps prolongée.

Protocol

1. Pour visualiser les neurones dans le cerveau intact en utilisant microscopie à deux photons, une préparation où les neurones sont étiquetées avec des marqueurs fluorescents sont utilisés. Dans les expériences présentées ici, nous utilisons la ligne de la GFP-M de souris transgéniques dont les étiquettes couche 5 cellules pyramidales ^1. Couche 5 cellules pyramidales de projet dans le processus dendritiques couches superficielles, permettant la visualisation des dendrites et des épines dendritiques jusqu'à une profondeur de 300 um en dessous du niveau de la pie. Une autre approche consiste à marquer les cellules en utilisant des marqueurs viraux (voir Lowery et al.,

Discussion

D'imagerie utilisant chronique microscopie à deux photons est de plus en plus populaire d'une technique pour étudier les changements morphologiques déclenchée pendant ^2-5 plasticité. Ici nous démontrons une préparation éclaircis-crâne à suivre identifié épines dendritiques dans le cerveau de souris intactes les jours d'imagerie. Dans ce protocole, le crâne est laissé intact, causant des dégâts minimes au cortex et résultant en des niveaux très bas de la neuroinflammation, qui peuvent altérer les f.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
	de fentanyl	dans le cocktail de		: cocktail anesthésique ; IP Dose : 0,0125 ml/g Cocktail final : 0,05 mg/kg
	médetomindine	Cocktail maison		fentanyl : Cocktail anesthésique ; IP Dose : 0,0125 ml/g Cocktail final : 0,05 mg/kg
Midazolam HCL		Cocktail maison		de fentanyl : Cocktail anesthésique ; IP Dose : 0,0125 ml/g Cocktail final : 0,05 mg/kg
2,2,2-tribrom– ; thanol				Avertin Cocktail : Anesthésique ; IP Dose : 0,0075 cc / g Cocktail final conc. : 1%
2-méthyl-2-butanol (Concentration finale : 0,775 %)				Avertin Cocktail : Anesthésique ; IP Dose : 0.0075 cc/ g Cocktail final conc. : .775 %
TC-1000 Système de contrôle de la température pour souris		CWE, Inc.	TC-1000 Régulation	de la température du corps
Toberadex		Pommade oculaire maison
10 % chlorure		Ricca Chemical Company	3120-32	Préparation du crâne mince
Lame		Sable Industries	S-6400	Préparation du crâne mince
Cyanoacrylate 404,401		Loctite	P/N 46551	Préparation du crâne mince
Cyanoacrylate 401		Loctite	P/N 40140	Préparation du crâne mince
Zip Kicker Glue Accelerator		Pacer Technology	PT-29	Préparation du crâne mince
Drill Meules en acier Diamètre		Outils scientifiques fins	19008-07	Préparation du crâne mince
Boîtier de commande Microtorque et pièce	à main Tech2000	Produits Ram, Inc.	TECH2000ON/OFF	Préparation du crâne mince
#6-0 (0,7 métrique ) suture		Ethicon Inc.	K8894H	conique C-1
, 10 cm, largeur de pointe 0,5 mm, incurvée	Outils de	science fine	11152-10
Ciseaux Bonn extra fins, 8,5 cm, pointe droite, tranchant 13 mm	Outils chirurgicaux	Outils de science fine	14084-08
Pince à motif standard, droite, pointe 2,5 mm x 1,35 mm, 12 cm	Outils chirurgicaux	Outils de science fine	11000-12