Une nouvelle méthode polyvalente pour l'observation de la microcirculation est présenté. Il est considéré comme convenable pour observation à long terme, et pour la combinaison avec pharmacophysiological ou moléculaire interventions biologiques.
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Article de méthode
In vivo la micro-circulation de mesure dans le muscle squelettique par voie intra-vitale microscopie
Dans cet article
Résumé
Résumé
CONTEXTE: Les facteurs réglementaires et de la physiologie de la microcirculation détaillée des vivo sont restés pas totalement clarifiée après de nombreuses différentes modalités d'imagerie avait inventé. Alors que de nombreux paramètres macroscopiques de l'écoulement sanguin reflète la vitesse d'écoulement, des changements dans la vitesse d'écoulement du sang et de globules rouges (GR) de flux ne tient pas de relation linéaire dans les observations microscopiques. Il ya des rapports de divergence entre RBC et RBC vitesse de flux, de flux et le volume de RBC flux de plasma, et de l'hétérogénéité spatiale et temporelle de la régulation du débit dans les tissus périphériques dans les observations microscopiques, une base scientifique pour l'exigence d'études plus détaillées en matière de réglementation microcirculatoire aide microscopie intravitale.
Méthodes: Nous avons modifié la méthode de Jeff Lichtman de l'observation microscopique in vivo dans des muscles sterno-souris. Les souris sont anesthésiées, aéré, et injecté avec PKH26L-fluorescence globules rouges marqués pour l'observation microscopique.
RESULTAT ET CONCLUSIONS: globules rouges marqués par fluorescence sont détectées et distinguées ainsi par un microscope à champ large. La contraction musculaire provoquée par augmentation de la stimulation électrique induite dans le flux de RBC. Quantification des autres paramètres, y compris la vitesse de RBC et de la densité capillaire étaient réalisables. Souris bien toléré la chirurgie, injection de globules rouges colorés, l'observation microscopique, et la stimulation électrique. Aucun muscle ou endommager les vaisseaux sanguins a été observée, suggérant que notre méthode est relativement moins invasive et adaptée aux observations à long terme.
Protocole
Coloration de la membrane de RBC
- Cellules rouges du sang de souris ont été corrigées à partir de la souche de souris même avec héparinisation.
- Souris RBC ont été colorés avec PKH26 colorant (551/567 nm; rouge kit fluorescentes linker cellulaire, Sigma, USA).
- RBC ont été lavés dans du PBS et incubées avec une solution de 2 pm PKH26 colorant pendant 5 minutes à température ambiante. La réaction a été stoppée par l'addition de plasma (inactivé par la chaleur pendant 1 heure à 65 ° C à l'avance) et incubées pendant 1 minute.
- Les vitraux de RBC ont été lavées 5 fois avec du PBS.
Préparation de....
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Discussion
Parmi les points techinical sont comme suit: (1) maintien de l'état physiologique de l'animal (aération, pH de la solution de la température du corps perfusative,), le volume d'injection (2) de l'tachés de RBC, et (3) les conditions d'observation (optique optimale sélection, l'intensité de fluorescence). Applications potentielles futures sont les suivants: (a) combinaison avec pharmacophysiological et / ou moléculaires interventions biologiques, (b) observation à long terme des artério / artériolo-sclérose et de la n.......
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Déclarations de divulgation
Toutes les procédures liées à l'expérimentation animale ont été examinés et approuvés par le Sous-Comité de protection des animaux de recherche du Massachusetts General Hospital.
Remerciements
Nous tenons à remercier JW Lichtman pour ses conseils en observation in vivo de muscles.
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Matériaux
| Nom | Entreprise | Numéro de catalogue | Commentaires | |
|---|---|---|---|---|
| Tissu PKH26 | Sigma-Aldrich | 551/567 nm ; kit de marquage cellulaire fluorescent rouge | ||
| Souris C57BL/10 | Animal | Mâles âgés de trois à six mois | ||
| Pentobarbital | Anesthésique, 50 mg/kg de poids corporel, i.p. |
Références
- Lichtman, J. W., Magrassi, L., Purves, D. Visualization of neuromuscular junctions over periods of several months in living mice. J Neurosci. 7, 1215-1222 (1987).
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Réimpressions et autorisations
