Administration orale de la roténone en utilisant un Gavage et analyse d'images d'alpha-synucléine inclusions dans le système nerveux entérique

Résumé

La maladie de Parkinson a été lié à l'exposition aux pesticides. Ici, nous montrons une méthode pour fournir des pesticides à l'aide d'une sonde gastrique à la concentration désirée et une méthode pour analyser leur effet dans l'accumulation d'alpha-synucléine dans le système nerveux entérique.

Résumé

Dans la maladie de Parkinson (MP) des patients, la pathologie associée suit un modèle caractéristique impliquant notamment le système nerveux entérique (ENS) ^1,2, le bulbe olfactif (OB), le noyau moteur dorsal du nerf vague (DMV) ^3, le intermédiolatérale noyau de la moelle épinière et ⁴ de la substantia nigra, fournissant la base pour la stadification neuropathologiques de la maladie ^4,5. L'ENS et l'OB sont les structures les plus exposées nerveux et les premières à être touchées. Fait intéressant, PD a été liée à ^6-8 exposition aux pesticides. Ici, nous montrons en détail deux méthodes utilisées dans notre étude précédente ^9. Afin d'analyser les effets de la roténone agit localement sur l'ENS, nous avons administré la roténone en utilisant un gavage à un an C57/BL6 souris. La roténone est un pesticide largement utilisé qui inhibe fortement complexe mitochondrial I ^10. Il est fortement lipophile et mal absorbé dans le tractus gastro-intestinal ^11. Nos résultats ont montré que l'administration de 5 mg / kg de roténone n'a pas inhibé l'activité complexe mitochondrial I dans le muscle ou le cerveau. Ainsi, ce qui suggère que la roténone en utilisant notre méthode d'administration n'a pas traversé le système hépatoportale et agissait uniquement sur l'ENS. Ici, nous montrons une méthode pour administrer les pesticides en utilisant un gavage et le protocole d'analyse d'images utilisés pour analyser les effets des pesticides dans l'alpha-synucléine accumulation dans l'ENS. La première partie montre une méthode qui permet l'administration intragastrique de pesticides (roténone) à une concentration désirée précis. La seconde méthode montre un protocole semi-automatique d'analyse d'images à analyser l'accumulation d'alpha-synucléine dans les ENS en utilisant un logiciel d'analyse d'image.

Protocole

1) Administration intragastrique de la roténone

1. Peser l'animal.
2. Calculer le volume total de la roténone / véhicule solution nécessaire. Dans ce cas 0,01 ml par gramme de poids de l'animal.
3. Chargez une seringue de 1 mL avec le volume calculé précédemment d'une solution de roténone (0,625 mg / mL roténone, la carboxyméthylcellulose de 4% et 1,25% de chloroforme) ou la solution du véhicule (carboxyméthylcellulose 4% et 1,25% de chloroforme). Dans ce cas, elle correspond à une dose de 5 roténone mg / kg.
4. Ramassez la souris et, tenant la queue de la souris avec une main, étirer la peau du cou en le tirant avec les deux premiers doi....

Discussion

L'administration intragastrique a déjà été réalisé ^12. Toutefois, selon le manuscrit de Inden, le roténone a été administré dissous dans le sel de carboxyméthylcellulose de sodium à 0,5% (CMSS) seul. La roténone est une substance de haute liphophylic. Par conséquent, la roténone ne peut pas être dissous dans CMSS 0,5% seul et va précipiter, si fait. L'utilisation de chloroforme crée une suspension roténone répartie uniformément en évitant la précipitation. Par ailleurs, en raison de la concentration é.......

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Rotenone	Sigma-Aldrich	R8875	Allemagne
Chloroforme	Carl Roth GmbH	3313.1	Allemagne
Carboxyméthylcellulose	Sigma-Aldrich	C5678	Allemagne
Sonde d'administration orale 1,2 mm x 60 mm	Unimed		Suisse
LSM 510	Carl Zeiss, Inc.
FIJI	http://pacific.mpi-cbg.de