Injection mur souris vessie

Résumé

Injection de mur souris vessie est une approche utile pour l'étude des cellules souches orthotopique de la vessie et la biologie du cancer. Cette méthode microchirurgicale délicates peuvent être maîtrisées avec une technique minutieuse et pratique.

Résumé

Injection de mur souris vessie est une technique utile pour étudier les phénomènes orthotopique vessie, y compris les cellules souches, le muscle lisse, et la biologie du cancer. Avant de commencer les injections, la zone chirurgicale doit être nettoyé avec du savon et de l'eau et une solution antiseptique. Équipements chirurgicaux doivent être stérilisés avant leur utilisation et entre chaque animal. Chaque souris est placée sous anesthésie à l'isoflurane inhalées (2-5% pour l'induction, de 1-3% pour l'entretien) et sa vessie exposée par une incision abdominale médiane avec des ciseaux. Si la vessie est pleine, elle est partiellement décompressées par serrant doucement entre deux doigts. La suspension de cellules d'intérêt est intra-muros injectée dans la paroi du dôme de la vessie à l'aide d'une aiguille de calibre 29 ou 30 et 1 cc ou moins seringue. La plaie est ensuite fermée à l'aide des clips de la plaie et la souris a permis de récupérer sur un pad réchauffement. Injection de paroi de la vessie est une technique de microchirurgie délicate qui peut être maîtrisé avec la pratique.

Protocole

1. Injection mur souris vessie

Choix de la souche de souris, l'âge et le sexe est dicté par les besoins expérimentaux. Nous utilisons des souris entre 8 et 12 semaines d'âge, puisque c'est une fenêtre de maturité immunologique avant la sénescence. En règle générale, les souris doivent arriver au moins une semaine avant la manipulation expérimentale, afin d'éviter le stress induit par des facteurs confondants.

1. Nettoyer la surface de la table de chirurgie avec du savon et l'eau.
2. Essuyez la surface de la table chirurgicale avec Swipes Cide ou des lingettes antiseptiques.
3. Autoclave nettoyer les instruments chirurgicaux avant de l'utiliser en chirurgie.
4. En outre, les stériliser les instruments chirurgicaux avec stérilisateur à billes chaudes immédiatement avant l'utilisation, ainsi qu'entre les animaux pendant la chirurgie.
5. Nettoyez 100 uL seringues Hamilton et 29 ou de calibre 30 (1 / 2 pouce de long) d'aiguilles par aspiration et l'injection répétée d'alcool absolu avant la première utilisation et à la fin de la procédure chirurgicale définitive.
6. Lavez et rincez les seringues stérilisées Hamilton avec un tampon phosphate salin entre chaque animal.
7. Anesthetize souris en les plaçant dans une chambre d'induction isoflurane, avec l'ensemble isoflurane entre 2-5%.
8. Une fois l'anesthésie générale est atteint, retirez la souris de la chambre et le placer dans la position couchée avec un tampon chaud en dessous pour aider à maintenir la température normale du corps.
9. Réaliser une anesthésie de maintenance en plaçant le museau de l'animal dans une buse contenant vaporisent l'isoflurane (titré à partir de 1-3% comme nécessaire pour maintenir une anesthésie appropriée).
10. Raser la peau de l'abdomen avec une tondeuse.
11. Utilisez un jetable, drapé chirurgical stérile pour couvrir l'anus pour empêcher la contamination fécale pendant la chirurgie.
12. Utilisez un deuxième jetables, drapé chirurgical stérile pour couvrir le champ opératoire (abdomen inférieur).
13. Préparation de l'abdomen avec trois morceaux de gaze imbibée de Bétadine. Répétez cette étape trois fois.
14. En utilisant un microscope à dissection pour l'agrandissement, faire une incision médiane inférieure abdominale avec des ciseaux.
15. Exposer la vessie.
16. Si la vessie est pleine, le décompresser partiellement par une pression douce à la baisse de la coupole.
17. Injecter la solution échantillon (jusqu'à 50 pi), en utilisant une aiguille de calibre 29 ou 30 et une seringue, dans la paroi de la vessie de la coupole (injection intra-muros) avec le biseau de l'aiguille vers le haut.
18. Poussez le piston de la seringue pour injecter la solution d'échantillon dans la paroi vésicale. Une bulle bien localisée est une indication de l'injection réussie des cellules dans la paroi vésicale.
19. Retirez la seringue, à proximité de l'incision avec des pinces de la plaie et permettent de récupérer la souris sur un pad réchauffement.

2. Les résultats représentatifs:

Une bulle bien localisées qui ne fluide fuite et reste stable dans la taille est une indication de l'injection réussie des cellules dans la paroi vésicale (figure 1). L'analyse histologique peut être effectuée pour confirmer la présence des cellules injectées dans la paroi de la vessie.

Figure 1. Exemple d'injection vésicale mur de succès en utilisant l'encre de Chine pour l'illustration.

Figure 2. Schéma des procédures expérimentales.

Discussion

Injection de la vessie mur de la souris permet l'implantation de cellules spécifiques dans des domaines précis de la paroi vésicale. Cette technique a des applications large pour les modèles murins de cancer de la vessie, le muscle lisse, et la biologie des cellules souches. Par définition, l'injection mur de souris vessie facilite l'introduction du cancer de la vessie ou de cellules souches dans un endroit orthotopique de sorte que leur croissance et leur différenciation peut être étudiée dans un contexte p...

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Nom du réactif	Société	Numéro de catalogue
L'isoflurane (Aerrane)	Baxter	NDC 10019-773-60
29 ou 30 aiguilles de calibre	Hamilton	7803-06 7803-07 ou
Seringue de 100 microlitre	Hamilton	7656-01