Évaluation des propriétés de signalisation ectodermique épithéliums au cours du développement cranio-facial

Summary

Cet article décrit une technique de transplantation de tissus qui a été conçu pour tester les propriétés de signalisation et de structuration de la surface ectoderme céphalique au cours du développement cranio-facial.

Abstract

L'accessibilité des embryons aviaires a aidé à comprendre les embryologistes expérimentale du sort des cellules pendant le développement et le rôle des interactions tissus qui régulent la structuration et la morphogenèse des vertébrés (par ^{exemple, 1, 2, 3, 4).} Ici, nous illustrons une méthode qui exploite cette accessibilité pour tester les propriétés de signalisation et de structuration des tissus ectodermiques lors de l'élaboration du visage. Dans ces expériences, nous créons de caille-chiches ⁵ ou ⁶ souris chimères chiches en transplantant l'ectoderme de surface céphalique qui recouvre la mâchoire supérieure de caille ou de la souris sur soit la même région ou d'une région extra-utérine d'embryons de poulet. L'utilisation de la caille en tissu du donneur pour une transplantation dans les poussins a été développé pour tirer parti d'un marqueur nucléolaire présente dans les cellules de caille, mais pas chiches, permettant ainsi aux enquêteurs d'hôte et de distinguer les tissus des donneurs ^7. De même, un élément répétitif est présent dans le génome de la souris et est exprimée de façon ubiquitaire, ce qui nous permet de distinguer les tissus hôtes et les donateurs dans les souris chimères chiches ^8. L'utilisation de la souris comme ectoderme tissu du donneur va augmenter considérablement notre compréhension de ces interactions tissulaires, parce que cela va nous permettre de tester les propriétés de signalisation des issues de différentes ectoderme embryons mutants.

Protocol

1. Préparer le tissu du donneur

1. Préparer les milieux de culture, d'affiner broches verre, affûter les aiguilles de tungstène.
2. Recueillir l'embryon de la coquille, lavez-les à PBS glacé.
   1. En utilisant une seringue de 10 ml et une aiguille 18 gauge retirer 1,0 ml d'albumine de l'extrémité pointue de la coquille d'oeuf.
   2. Faire un petit trou sur le dessus de la coquille en utilisant le point de ciseaux, puis couper une ouverture circulaire pour exposer l'embryon
3. Retirez la tête et la placer dans du DMEM (sans sérum, température ambiante)
4. Disséquer processus fronto partir de l'embryon (ou l....

Discussion

En utilisant cette méthode de transplantation nous a permis de déterminer que l'ectoderme contient des informations de signalisation qui régule la polarité dorso-ventrale et l'extension proximodistal de la mâchoire supérieure. La similitude des résultats lors de l'utilisation de caille ou ectoderme de la souris, et la conservation des signaux moléculaires dans ce tissu parmi les nombreuses espèces ^6,11 indique qu'il s'agit d'un centre de signalisation hautement conservée chez les verté.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
1x PBS	Tektronix, Inc.
DMEM	Université de Californie - San Francisco	CCFDA003
BSA	Sigma-Aldrich	A7906
Dispase	GIBCO, par Life Technologies	17105-041
35x10 mm Boîte de Pétri	Falcon BD	1008
No. 5 Pince Dumont	Fine Science Tools	11252-20
Ciseaux	Fine Science Tools	14058-11
Ciseaux à ressort	Fine Science Tools	15010-11
Porte-aiguille	Fine Science Tools	26016-12
Aiguille en tungstène	Fine Science Tools	26000
Tube microcapillaire	Drummond Scientific	3-000-225-G
Pasteur Pipets	Fisher Scientific	13-678-6B
Ciseaux à ressort	Outils pour les sciences fines	15010-11
Porte-lame	pour les sciences fines	10052-11
Lame de rasoir	Outils pour les sciences fines	10050-00