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Définition de la distribution subcellulaire des complexes de signalisation est impératif de comprendre la sortie de ce complexe. Les méthodes conventionnelles telles que immunoprécipitation ne fournissent pas d'informations sur la localisation spatiale des complexes. En revanche, BiFC surveille l'interaction et la compartimentation subcellulaire des complexes protéiques. Dans cette méthode, une protéine fluororescent est divisé en amino-et carboxy-terminale non fluorescent fragments qui sont ensuite fusionnées à deux protéines d'intérêt. Interaction des résultats des protéines dans la reconstitution du fluorophore (figure 1) 1,2. Une limitation de BiFC n'est qu'une fois que le fluorophore fragmenté est reconstitué le complexe est irréversible 3. Cette limitation est avantageuse dans la détection des interactions transitoires ou faible, mais s'oppose à une analyse cinétique de la dynamique complexe. Une mise en garde supplémentaire est que le flourophore reconstituée nécessite 30min à mûrir et à fluorescence, à nouveau obstacle à l'observation des interactions en temps réel 4. BiFC est un exemple précis du dosage de complémentation protéique fragment (PCA) qui emploie des protéines telles que le vert journaliste de variants de la protéine fluorescente (BiFC), la dihydrofolate réductase, b-lactamase, et la luciférase pour mesurer des protéines: les interactions entre protéines 5,6. Les méthodes alternatives à l'étude des protéines: les interactions entre protéines dans les cellules comprennent la fluorescence de co-localisation et de Förster Resonance Energy Transfer (FRET) 7. Pour la co-localisation, deux protéines sont individuellement marqués soit directement avec un fluorophore ou par immunofluorescence indirecte. Cependant, cette approche conduit à fond élevé de non-interaction des protéines ce qui rend difficile d'interpréter la co-localisation des données. En outre, en raison de la limite de résolution de la microscopie confocale, deux protéines peuvent apparaître co-localisées, sans nécessairement interagir. Avec BiFC, la fluorescence n'est observée lorsque les deux protéines d'intérêt interagissent. FRET est une autre excellente méthode pour étudier les protéines: les interactions entre protéines, mais peut être techniquement difficile. FRET expériences exigent des donneurs et accepteurs d'être d'une luminosité similaire et la stœchiométrie dans la cellule. En outre, on doit tenir compte de saigner à travers les bailleurs de fonds dans le canal de l'accepteur et vice versa. Contrairement FRET, BiFC a peu de fond de fluorescence, de post-traitement peu de données d'image, ne nécessite pas de surexpression élevé, et peut détecter des interactions faibles ou transitoires. Transfert d'énergie par résonance de bioluminescence (BRET) est une méthode similaire à l'exception de FRET le donateur est une enzyme (luciférase, par exemple) qui catalyse un substrat de devenir bioluminescents donc passionnante un accepteur. BRET manque les problèmes techniques de saigner à travers et la fluorescence de fond élevé, mais n'a pas la capacité de fournir des informations spatiales en raison du manque de substrat à la localisation des compartiments spécifiques 8. Globalement, BiFC est une excellente méthode pour visualiser la localisation subcellulaire des complexes de protéines afin de mieux comprendre la signalisation compartimentée.