Inoculation intramuqueuse de cellules cancéreuses dans un modèle murin : une procédure pour établir un modèle murin orthotopique de cancer de la tête et du cou

Résumé

Source : Oweida, A. J. et al. Inoculation intramuqueuse de cellules de carcinome épidermoïde chez la souris pour le profilage immunitaire tumoral et l’évaluation de la réponse au traitement. J. Vis. Exp. (2019)

Dans cette vidéo, nous développons un modèle murin de cancer orthotopique de la tête et du cou par inoculation intramuqueuse de la lignée cellulaire du carcinome épidermoïde. La souris porteuse de la tumeur présenterait une ressemblance avec des symptômes cliniquement pertinents de la maladie humaine et pourrait donc être utilisée pour étudier la progression du cancer et découvrir de nouvelles stratégies thérapeutiques.

Protocole

Toutes les procédures impliquant des modèles animaux ont été examinées par le comité institutionnel local de protection des animaux et le comité d’examen vétérinaire JoVE.

1. Injection de cellules chez la souris

1. Préparez un mélange 1:1 de cellules : matrice de membrane basale (50 μL chacune).
2. Ajoutez d’abord les cellules, puis, pipetez progressivement la matrice de la membrane basale. Évitez d’introduire des bulles d’air. S’assurer que le mélange est fait immédiatement avant l’injection chez l’animal. L’ajout de cellules à la matrice de la membrane basale pendant une période prolongée peut entraîner l’affaissement des cellules dans le mélange matriciel, ce qui rend le mélange difficile à secouer vigoureusement. Cela entraînera une variabilité considérable de la taille de la tumeur entre les souris.
3. Mélangez délicatement. Assurez-vous que toutes les étapes impliquant la matrice sont effectuées sur de la glace. La matrice de la membrane basale polymérisera à température ambiante.
4. Préparez les seringues pour l’inoculation.
5. Chargez des seringues à insuline de 0,5 mL (23G) avec 100 μL de solution de matrice de la membrane cellule/bas.
6. Gardez les seringues sur de la glace pour éviter la polymérisation de la matrice de la membrane basale.
7. Anesthésier les souris en les plaçant dans une chambre contenant de l’isoflurane et de l’oxygène (2,5 %).
8. Assurez-vous que les souris sont profondément anesthésiées avant d’effectuer l’injection (en s’assurant de l’absence de réponse à un pincement de l’orteil).
9. Insérez l’aiguille dans la région buccale droite ou gauche. Cela se fait par l’espace ouvert disponible de chaque côté de la bouche.
10. Assurez-vous que la langue de la souris n’est pas gênante.
    REMARQUE : Il est facile de piquer la langue, ce qui entraînera des tumeurs de la langue. Déplacez la langue du côté opposé si nécessaire.
11. Gardez la seringue parallèle à la région buccale à l’intérieur de la cavité buccale.
12. Lorsque vous êtes prêt à injecter, tirez la seringue vers l’arrière et insérez-la lentement à un angle de 10°.
13. Injecter 100 μL de suspension de la matrice de la membrane cellule/basale sur une période de 5 s.
14. Maintenez la seringue en place pendant 5 secondes supplémentaires pour vous assurer que tout le matériel est injecté.
    REMARQUE : Pour les souris témoins non porteuses de tumeurs, injectez un mélange de milieux sans sérum et de matrice (comme décrit ci-dessus) sans les cellules tumorales.
15. Retirez doucement la seringue.
16. Continuez la procédure ci-dessus avec les souris restantes.
17. Attendre 1 semaine jusqu’à ce que les tumeurs commencent à apparaître grossièrement (50-200^mm3 pour les cellules B4B8 et LY2).

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
HBSS	ThermoFisher Scientific	14175079	Sans calcium, sans magnésium, sans phéno rouge
Cytomètre de masse d’Hélois	Fluidigm	Na
Matrice membranaire Matrigel	Corning	Réf. CB-40234B